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RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;miRNA途径:
miRNA可以降解mRNA,或者抑制mRNA翻译蛋白质;RNAi作用机制;RNAi实验
三大基本路线;RNAi 技术原理;(1)构建目的基因载体,选取目的基因的特异性序列(约200bp~300bp),构建到T载体上。
?(2)使用5′端连接有T7启动子的引物PCR扩增目的基因,得到两端均连接有T7启动子 序列的目的基因片段。
(3)T7RNA聚合酶进行转录。dsRNA、ssRNA、DNA模板。
(4)加入Rnase 和Dnase消除ssRNA和DNA模板。
(5)离心纯化dsRNA。
;RNAi 技术原理 ppt课件;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理; 此法需首先化学合成一段编码siRNA 正义和反义链的模板,正义与反义序列之间由一段环(1oop)序列隔开。插入载体Pol Ⅲ启动子下游,然后转入细胞,环序列可使转录出的RNA链折叠成具发夹结构的小RNA分子(shRNA) ,这些小RNA可被细胞内的Dicer切割为长21bp的siRNA。;RNAi 技术原理 ppt课件; RNAi作为一种重要的基因转录后沉默机制,广泛应用于基因功能研究,肿瘤及病毒感染性疾病治疗的实验研究,其核心内容是siRNA能够抑制同源基因的表达。对于siRNA 而言,现在颇有争议的地方在于它对靶基因的沉默特异性,主要体现在两个方面:
(1)脱靶效应。
(2)打破内源性miRNA的平衡。;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;RNAi 技术原理;miRNA途径:
miRNA可以降解mRNA,或者抑制mRNA翻译蛋白质;RNAi作用机制;RNAi实验
三大基本路线;RNAi 技术原理;(1)构建目的基因载体,选取目的基因的特异性序列(约200bp~300bp),构建到T载体上。
?(2)使用5′端连接有T7启动子的引物PCR扩增目的基因,得到两端均连接有T7启动子 序列的目的基因片段。
(3)T7RNA聚合酶进行转录。dsRNA、ssRNA、DNA模板。
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