中国药典四部色谱法概况.pptxVIP

中国药典四部色谱法概况;BEAConfidential.|2;2015版四部色谱法目录;BEAConfidential.|4;;毛细管电色谱法　（CEC）;;色谱法在中国药典中的沿革;0501纸色谱法;0501纸色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;Rf = 0.2~0.8;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0502薄层色谱法;0511 柱色谱法; 高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号;高效液相色谱仪流程图;0512液相色谱法;色谱柱 ;检测器 ;增加了超高效液相 色谱柱内径（约2mm或更小），粒径（约2μm或更小） （结果产生争议时，应以品种项下规定的色谱条件的测定结果为准） 温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但不宜超过60℃。 品种正文项下规定的条件除填充剂类型、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱内径与长度、填充剂粒径、流动相速度、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。;;HPLC：系统适用性要求（通则） 中国药典要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，要求达到规定的要求或满足在分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度、重复性和拖尾因子等相关规定。 色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、灵敏度、拖尾因子和重复性等五个参数。按各品种正文项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，以符合要求。 ;要求： --理论塔板数N：大于规定值（按规定方法计算，具体品种） --拖尾因子T：应在0.95-1.05之间（以峰高定量时） --分离度R：应大于1.5 --重复性：连续进样5次，峰面积的相对标准偏差不大于2.0% --灵敏度：（新增）→定量：10:1；定性：3:1 ;系统适用性试验 （1）色谱柱理论板数（n） 具体品种要求不同 用于评价色谱柱的分离效能。由于不同物质在同一色谱柱上的色谱行为不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论板数。 在规定的色谱条件下，注入供试品溶液或各品种项下规定的内标物质溶液，记录色谱图，量出供试品主成分峰或内标物质峰的保留时间tR（以分钟或长度计，下同，但应取相同单位）和峰宽（W）或半高峰宽（Wh/2），按n= 16（ tR /W）2或n=5.54（tR／Wh∕2）2计算色谱柱的理论板数。 ;无论是定性鉴别还是定量分析，均要求待测峰与其他峰、内标峰或特定的杂质对照峰之间有较好的分离度。除另有规定外，待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5;系统适用性试验 （3）灵敏度（S/N） 定量测定时，信噪比应不小于10；定性测定时，信噪比应不小于3.系统适用性试验中可以设置灵敏度测试溶液来评价色谱系统的检测能力。 ;系统适用性试验 （4）拖尾因子（T） 以峰高作定量参数时，除另有规定外，T值应在0.95~1.05之间。 ;（5）重复性 用于评价色谱系统连续进样时响应值得重复性能。 采用外标法时，通常取各品种项下的对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值得相对标准偏差应不大于2.0%； 采用内标法时，通常配置相当于80%、100%、120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3中不同的浓度，分别进样2次，计算平均校正因子，相对标准偏差应不大于2.0%;测定法 (1) 内标法 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和内标物质，分别配成溶液，精密量取各适量，混合配成校正因子侧定用的对照溶液。取一定量注入仪器，记录色谱图，测量对照品和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算校正因子： 再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液，注入仪器，记录色谱图，测量供试品中待测成分和内标物质的峰面积或峰高，按下式计算含量： ;测定法 (2) 外标法 按各品种项下的规定，精密称（量）取对照品和供试品，配制成溶液，分别精密取一定量，注入仪器，记录色谱图，测量对照品溶液和供试品溶液中待测成分的峰面积（或峰高），按下式