仪器分析课件-芦丁含量测.pptVIP

* 可见分光光度测定中通常是被测物质与显色剂反应，生成有色物质，然后测定其吸光度，进而求得被测物质的含量。 * 必须控制反应条件，主要是溶剂种类、试剂种类、溶液酸碱度、显色时间及反应时间。显色反应：将试样中被测组分转变成有色化 合物的化学反应 优点：⑴一般ε104，灵敏度高。 ⑵稳定，离解常数小。 ⑶选择性高，专属性强。 加亚硝酸钠还原被氧化的酚羟基，使其能与铝离子络合，并且提供一个碱性环境（在酸性环境中铝离子不与邻二酚羟基络合），络合之后，产生一个稳定的特征吸收峰，但是在这个波长之下，杂质干扰较多，因此加氢氧化钠使吸收峰红移，避免杂质干扰（杂质不红移）。红移原因，碱性使酚羟基解离，p-π共轭，红移。（ * 在给定波长、溶剂和温度等条件下， K是物质特征常数，表明物质对某一特定波长光的吸收能力。 可见分光光度法测定芦丁含量 （1） 掌握可见分光光度计的使用 （2） 了解显色反应基本原理 （3） 掌握标准曲线法测定组分含量的 定量分析方法 一、实验目的： 分光光度法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内光的吸光度, 对该物质进行定性和定量分析的方法。 二、实验原理 A 光源 单色器 吸收池 检测器 显示 芦丁又名芸香甙，是维生素P的主要成分之一，属黄酮类化合物，临床上主要用于治疗脑溢血，高血压，视网膜出血等疾病。 芦丁的含量测定主要有高效液相色谱法、紫外分光光度法和可见分光光度法。 实验原理 芦丁分子结构中含有酚羟基和环酮基结构， 能与Al3+生成黄色配合物，在亚硝酸钠的碱性溶液中呈现红橙色，最大吸收波长510nm。 芦丁分子结构： 定量原理： Lambert-Beer’s Law 当入射光波长一定时，溶液对光的吸收程度只与溶液浓度和液层厚度有关。 A = k c l = -lgT = lgI0 / I 三、实验步骤 项目/编号 1 2 3 4 5 6 测定管 标准溶液(ml) 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 1.5(样品) 60%乙醇(ml) 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0 1 亚硝酸钠溶液(ml) 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 摇匀，放置6min 硝酸铝 溶液(ml) 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 0.15 摇匀，放置6min 氢氧化钠溶液(ml) 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 蒸馏水稀释至5ml，振荡，放置15min，510nm比色。第1管作空白 四、实验记录：见讲义 五、数据处理及结果： 1.以各标准溶液浓度（mg/ml）为横坐标，各管吸光度值为纵坐标，作图既得标准曲线。 2.根据样品溶液的吸光度查标准曲线得样品稀释后芦丁的浓度， 3.换算求得样品中芦丁的百分含量 实验注意事项： 正确使用刻度移液管，可见分光光度计； 小心使用各种玻璃器皿、比色皿； 正确绘制标准曲线； 实验结束后，清洗自己使用过的试管； 安排值日生打扫实验室卫生。 * 可见分光光度测定中通常是被测物质与显色剂反应，生成有色物质，然后测定其吸光度，进而求得被测物质的含量。 * 必须控制反应条件，主要是溶剂种类、试剂种类、溶液酸碱度、显色时间及反应时间。显色反应：将试样中被测组分转变成有色化 合物的化学反应 优点：⑴一般ε104，灵敏度高。 ⑵稳定，离解常数小。 ⑶选择性高，专属性强。 加亚硝酸钠还原被氧化的酚羟基，使其能与铝离子络合，并且提供一个碱性环境（在酸性环境中铝离子不与邻二酚羟基络合），络合之后，产生一个稳定的特征吸收峰，但是在这个波长之下，杂质干扰较多，因此加氢氧化钠使吸收峰红移，避免杂质干扰（杂质不红移）。红移原因，碱性使酚羟基解离，p-π共轭，红移。（ * 在给定波长、溶剂和温度等条件下， K是物质特征常数，表明物质对某一特定波长光的吸收能力。