实验一大肠杆菌的培养与分离.pptxVIP

实验一大肠杆菌的培养与分离;1-2 传统生物技术;1-3 现代生物技术;选修1需学习的实验;实验1 大肠杆菌的培养和分离 ;一、基础知识 ;特点：结构简单，形体微小，通常要用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构。;1）放线菌;2）病毒;SARS病毒、 禽流感病毒;朊病毒（蛋白质病毒）;病毒的增殖：;3）真菌;;4）细菌的外形与大小;*细胞壁;芽孢; 革兰氏染色： 代谢类型： 主要分布： 危害： 应用：;二、微生物的培养:;天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;;不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐、生长因子等营养物质，另还需要满足微生物生长对pH 、氧气、渗透压要求．;细菌喜荤，霉菌喜素;三、无菌技术;（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 ;（１）消毒定义：;1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃下煮15min（牛奶） 3、化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒（空气）;1）干热灭菌法;2）高压蒸气灭菌法： 100kPa、121 ℃下维持15-30min.;紫外线的光谱范围是100~400nm，灭菌最有效的波长是253.7nm。;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？;四、实验设备和用品：;2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈P22 P26;接种环;2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈;恒温培养箱;2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈P22 P26;摇床;2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈;超净工作台;2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈P22 P26;广口瓶;2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈P22 P26;有棉塞的试管;五、大肠杆菌的培养与分离;1．培养基的配制　 2、灭菌 3、分装： 4、利用液体培养基进行大肠杆菌的扩大培养 5、划线分离和培养 6、菌种保存;1．培养基的配制;大肠杆菌菌种斜面; 2、灭菌;;消毒： 用肥皂将双手洗净，擦干，再用 酒精(体积分数为75%)棉球擦拭双手。;3、分装 —— 倒平板;3、分装 —— 倒平板;3、分装 —— 倒平板;3、分装 —— 倒平板;做好无菌检查工作： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养 24—48小时，以检查灭菌是否彻底。;注意事项： ①分装时，三角瓶口、试管口、壁上不能沾有培养基; 4. 大肠杆菌的扩大培养;放入37℃摇床振荡培养12小时;5. 大肠杆菌的划线分离;;不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。;;; ;平板划线分离法的注意事项：;分离后,一个菌体便会形成一个菌落,这是消除污染杂菌的通用方法,也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一;;菌落——单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体。 菌落是鉴定菌种的重要依据。;问题讨论; 2. 在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;2、涂布分离法:是指将培养的菌液稀释一定的倍数,然后取一定量稀释液加在固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上.;2、涂布分离法;思考：划线分离法和涂布分离法哪个更好呢？;五、培养 将接种后的培养皿放入恒温箱内，在37℃下培养12-24h。;微生物的恒温培养;菌种的保存;1.如何操作才可以尽量避免被杂菌污染?;2.在培养后如何判断是否有杂菌污染?;3.进行恒温培养时为什么要将培养皿倒置?;4.实验完成后,接种过细菌的器皿应如何处理?;5.如果分离的是转基因的大肠杆菌,如何保证不被普通的大肠杆菌所污染?;;细菌的革兰氏染色 ;根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。 自养菌: 异养菌: 腐生菌 寄生菌 大部分病原菌 ;选择培养基;芽孢;;;1、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min. 2、灼烧灭菌 3、紫外线灭菌 4、过滤灭菌 5、化学灭菌;4)培养基的配制与灭菌;三、细菌的分离： 原理: 不同的细胞具有不同的菌落特征; 有些微生物对抗生素、高盐等具有抗性的特点。 方法: 划线法 选择培养基培养;;;第94页/共95页;感谢观看!