基因诊断与基因治疗生物化学.pptxVIP

基因诊断与基因治疗生物化学;一、基因诊断的概念、特点及临床意义 ;诊断依据(遗传物质改变) DNA、RNA或蛋白质水平变化，如病毒基因及其转录产物在体内从无到有、癌基因表达水平从低到高； 基因结构变化，如点突变引起基因失活、染色体转位引起基因异常激活或灭活。;基因诊断的特点 高特异性 高灵敏性 早期诊断性 应用广泛性;二、基因诊断中常用的分子生物学技术;单链构象多态性分析（single-strand conformation polymorphism, SSCP）;PCR-SSCP分析原理示意;; 限制性片段长度多态性分析 （restriction fragment length polymorphism, RFLP）; 设计适当的扩增引物，使扩增片段包括某一个或数个限制性内切酶识别序列，在PCR扩增后用该限制酶切割PCR产物，根据电泳后酶切片段长度变化，即可作出诊断。;;DNA序列测定 (双脱氧末端终止法);左侧：正常；右侧突变 ;基因芯片杂交流程示意图;基因诊断中常用的分子生物学方法比较;基因诊断技术路线与方法;（一）直接诊断途径;;斑点杂交、反向斑点杂交 AS-PCR、PCR-SSCP、 PCR-ASO、 PCR产物直接测序; 在DNA序列上有一段较长序列的重新排布。包括数十个碱基到数千个碱基的丢失、插入、替换、重复和倒位等，以及染色体突变或畸变，包括染色体的易位、缺失或染色三体（如唐氏综合征）等。 ;; 根据引物3′端的互补与否，设计一对与正常或突变模板配对的特异引物;3. 基因表达异常的检测 mRNA的相对定量分析 mRNA的绝对定量分析 mRNA长度分析;（二）间接诊断途径; DNA多态性：指群体中的DNA分子存在至少两种不同的类型，即个体间同一染色体的相同位置上核苷酸序列存在一定的差异或变异。 多在进化中形成，本身并不致病，只是与某些遗传性致病基因有一定连锁关系。;间接诊断：检测与致病基因连锁的遗传标记;; 遗传病的基因诊断Gene Diagnosis of Hereditary Diseases;一、血红蛋白病（hemoglobinopathy） （一）镰状细胞贫血病 （二）β-珠蛋白生成障碍性贫血症 二、血友病（Hemophilia） 甲型血友病基因诊断 三、脆性X综合征 ;（一）镰状细胞贫血病;正常的（N）的ASO探针： 5′-ACT CCT GAG GAG AAG TCT GC-3′ 突变的（M）的ASO探针： 5′-ACT CCT GTG GAG GAAG TCT GC-3′ ;斑点杂交结果 N：正常；M突变;;;3. HBS的PCR-RFLP分析 ;1. PCR-RFLP分析 ;?-珠蛋白生成障碍性贫血症的反向斑点杂交分析;二、血友病（Hemophilia）;1. FVIII基因倒位的DNA印迹分析;2. FVIII基因突变的检测;三、脆性X综合征;脆性X综合征常用基因诊断方法;感染病的基因诊断 Gene Diagnosis of Infectious Diseases; 一、病毒性疾病;二、细菌引起的疾病;三、寄生虫及衣原体感染;肿瘤的基因诊断Gene Diagnosis of Malignant Tumors;一、原癌基因与抑癌基因的检测 二、常见肿瘤的基因诊断 乳腺癌 结肠癌 ;一、原癌基因与抑癌基因的检测; PCR 及PCR-SSCP分析：扩增ras 基因第12位密码子点突变部位，再用SSCP技术进行分析，或者直接测序确定患者ras原癌基因的点突变。 核苷酸杂交技术（如ASO）：检测ras基因第12位密码子点突变。;3．抑癌基因p53的检测 ;基因诊断在法医学上的应用Application of Gene Diagnosis in Forensic Medicine;重复序列以各自核心序列（重复单元）首尾相连多次重复，称为串联重复序列，其重复次数在人群中存在变异，形成多态性。 串联重复序列散在分布于染色体上。 重复单位6～25 bp长，称为小卫星DNA。重复单位2～6 bp长，如（TA）n, (CGG)n等，称为微卫星DNA。;;二、DNA指纹与法医学诊断;基因治疗的概念及策略 Concept and Strategy of Gene Therapy;基因治疗：指将目的基因通过基因转移技术（病毒载体介导或者非病毒载体介导的基因转移技术）导入靶细胞内，目的