动物细胞制药课件.pptxVIP

动物细胞制药 一、培养基的基本要求 营养成分 促生长因子 激素 渗透压 pH 无毒、无污染一、培养基的基本要求1. 营养成分 氨基酸 氨基酸是细胞合成蛋白质的原料。所有细胞都需要12种必须氨基酸： 缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱。 此外还需要谷氨酰胺，它在细胞代谢过程中有重要作用，所含的氮是 核酸中嘌呤和嘧啶合成的来源，同样也是合成三、二、一磷酸酰苷所 需要的基本物质。 单糖 培养中的细胞可以进行有氧与无氧酵解，六碳糖是主要能源。此外六 碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。细胞对葡萄糖的吸收 能力最高，半乳糖最低。一、培养基的基本要求1. 营养成分 维生素： 主要是辅酶、辅基，必不可少。生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、 吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12 都是培养基常有的成分。 无机离子与微量元素 细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮、磷等基本元素，还需要微 量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。一、培养基的基本要求2. 促生长因子及激素 各种激素、生长因子的功能 维持细胞的功能 保持细胞的状态（分化或未分化） 有些激素对许多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利 用葡萄糖和氨基酸。 有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细 胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。一、培养基的基本要求3. 渗透压 细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性 人血浆渗透压 290 mOsm/kg，可视为培养人体细胞的理想渗透压 鼠细胞渗透压在 320 mOsm/kg 左右。 大多数哺乳动物细胞，渗透压在 260～320 mOsm/kg 的范围都适宜一、培养基的基本要求4. pH 大多数细胞适宜 pH为7.2～7.4 培养基应具一定的缓冲能力 造成 pH 波动主要是代谢产生的 CO2，在封闭式培养过程中 CO2 与 水结合产生碳酸，培养基 pH 很快下降。 为解决这一问题，合成培养基中使用了NaHCO3-CO2 缓冲系统，通 过稳定调节温箱中 CO2 浓度（5％），使之与培养基中的 NaHCO3 处于平衡状态一、培养基的基本要求5. 无毒、无污染 体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有任何抵抗能力， 因此培养基应达到 无化学物质污染 无微生物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等） 无对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、补体） 对于天然培养基，污染主要来源于取材过程及生物材料本身，应当 严格选材，严格操作。 对于合成培养基，污染主要来源于配制过程，配制所用的水，器皿 应十分洁净，配制后应严格过滤除菌。二、天然培养基 天然培养基血清的种类血清的主要成分和作用血清的质量标准血清的外观血清的使用与储存使用血清的优缺点二、天然培养基 天然培养基 天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如 血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。 但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异大，因此逐渐为合成培 养基所替代。 目前广泛使用的培养基是血清，另外各种组织提取液、促进细胞贴壁 的胶原类物质在培养某些特殊细胞也是必不可少。二、天然培养基 血清的种类? 小牛血清 取自出生 10～30 天的小牛 新牛血清 取自出生 24 小时之内的新生牛 胎牛血清 取自剖腹产的胎牛，血清中所含的抗体、 补体等对细胞有害的成分最少二、天然培养基 血清的主要成分和作用 主要成分 血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的，血清中含有各种血浆蛋白、 多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等 主要作用 提供基本营养物质 提供激素和各种生长因子 提供结合蛋白 对培养中的细胞起到某些保护作用二、天然培养基 血清的质量标准 血清质量高低取决于两方面因素：一是取材对象，二是取材过程。? 理化性质 渗透压、pH值、蛋白电泳图谱、蛋白含量、激素水平、内毒素等。 蛋白含量包括血清总蛋白含量（不低于35-45g/L）、球蛋白含量（应 小于20g/L)、血红蛋白含量等。其中球蛋白含量是一项非常重要的指 标，血清中球蛋白主要是抗体，球蛋白含量越低血清质量越高。血红 蛋白也是越低越好。二、天然培养基 血清的质量标准 微生物检测 包括细菌、真菌、支原体、病毒等。特别是对支原体、病毒的检测 支原体是一种很小的微生物，可通过孔径 22mm 的滤膜。支原体、 病毒污染在光学显微镜下难于察觉，细胞也能生长繁殖，但会影响 实验结果。 检测支原体的方法很多，如培养法、PCR法、荧光染色法、电镜观 察法等。二、天然培养基 血清的质量标准 促生长效果 这是血清重要的特性之一，应以培养的细胞来检测 克隆形成率 悬浮生长的细胞，有限稀释法，统计克隆生长百分比 贴瓶率测定 贴壁细胞，集落数占接种细胞数的百分比 续传代培养