菌种选育保藏与复壮.pptxVIP

菌种选育保藏与复壮;（二）放线菌（actinomyces） 最大的经济价值在于产生多种抗生素（antibiotic） 链霉菌（Streptomyces） 小单孢菌属（Micromonospora）; （三）霉菌（mould） 1.曲霉属（Aspergillus） 黑曲霉（A. niger） 米曲霉（A. oryzae） 黄曲霉（A. flavus） 2.青霉属（Penicillum） 桔青霉（P. citrinum） ;3. 根霉属（Rhizopus ） 米根霉（R. oryzae） 华根霉（R. chinensis） 4. 红曲霉属（Monascus）;（四）酵母（yeast） 酵母属（Saccharomyces） 啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae） 2. 假丝酵母属（Candida） 产朊假丝酵母（Candida utilis） 3. 毕赤酵母属（Pichia） ;（五）其它微生物 1.担子菌（basidiomycetes）即菇类（mushroom） 2. 藻类（alga）;几种菌落; （六）噬菌体（phage） 危害以细菌和放线菌为生产菌株的发酵工业。 ;烈性噬菌体 ——引起寄主细胞迅速裂解。 受感染的细菌称敏感性细菌。 温和噬菌体 ——随寄主细胞的繁殖而繁殖。 含温和噬菌体的细菌称溶原性细菌。; 二、微生物工业对菌种的要求 1.原料廉价，生长迅速，目的产物产量高。 2.易控制培养条件，发酵周期较短。 3.抗杂菌和噬菌体的能力强。 4.不易变异和退化，不产生任何有害物质和 毒素。 ; 第二节 工业微生物菌种的选育 一、自然选育 1.采样 2.增殖培养 方法： （1）控制培养基成分 （2）控制培养条件 （3）抑制不需要的菌类;3. 纯种分离 （1）划线法：简单、快捷。 （2）稀释法：菌落单一均匀。;固体培养基四区划法接种法;接种针先以火焰灭菌法灭菌 ;轻触营养平板上无菌的琼脂处冷却 ;以接种针轻触菌落，使接种针上沾有细菌。 ;更换一个新的无菌营养平板 ;将接种针上的细菌划于一个新的营养平板上。此为第一菌区 。;重复第一步骤，将接种针以火焰灭菌法灭菌，然后轻触琼脂无菌处冷却。;由第五步骤的第一区中划出第二区，如右上图。;重复第六以及第七步骤，由第七步骤的 第二区中划出第三区，如右上图。 ;重复第六以及第七步骤，由第八步骤的第三区中划出第四区，划满剩下的空间。完成后的营养平板，如右上图。; 在营养平板上贴好标???，标示好接种日期、操作者姓名、菌种学名以及培养基名称。;固体培养基的稀释涂抹接种法;需要使用的仪器——震荡机 ;吸取准备好欲稀释的菌液;吸取充分均匀后的菌液 ;取含有 9mL无菌水之试管，将试管口过火灭菌。 将菌液置入，此时试管须做记号为第一次稀释。;将试管于震荡机上，使菌液混合均匀 ;取出试管中的第一次十倍稀释菌液1mL， 加入另一个新的含9mL无菌水的试管中。 重复此步骤直至所需要的稀释浓度。 ;从最后稀释菌液中吸取 0.1mL菌液，置入准备好的无菌琼脂内。;将三角玻璃棒浸于酒精中 ; 将三角玻璃棒在火焰上燃烧 （须注意勿使燃烧中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃烧） ; 使用玻璃棒将菌液均匀涂布开来，将培养皿置于恒温培养箱中隔天观察菌落数目，再依照稀释倍数推算出菌液浓度。 ;第35页/共58页;; 二、诱变育种 用各种物理、化学的因素人工诱发基因突变。 诱变剂：能够提高生物体突变频率的物质。 ; 诱变育种的主要环节 （1）以合适的诱变剂处理细胞悬浮液 ——诱变 （2）用合适的方法淘汰负效应变异株， 选出性能优良的正变异株——筛选; 第三节 生产菌种的改良 一、原生质体融合（protoplast fusion） 1.标记菌株的筛选 2.原生质体的制备 3.原生质体的融合与再生 聚乙二醇（PEG）－脱水剂 助融剂 Ca2+－提高融合频率 4.融合子的选择;; 二、DNA重组技术 （DNA recombination technology） 目标DNA片断的获得 与载体DNA分子的连接 重组DNA分子引入宿主细胞 从中选出所需重组DNA分子的宿主细胞; 第四节 菌种的衰退、复壮与保藏 一、菌种的衰退 衰退的原因： 1.菌种保藏不当 2.菌种生长条件没有得到满足;二、 菌种的复壮 1. 纯种分离 2