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生物化学实验——糖的定量测定; ; 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类,单糖都是还原糖,双糖和多糖不一定是还原糖,其中乳糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同,可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,对没有还原性的双糖和多糖,可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定,再分别求出样品中还原糖和总糖的含量(还原糖以葡萄糖含量计)。; 3,5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物:
在一定范围内,棕红色物质颜色的深浅程度与还原糖的量成正比。因此,我们可以利用比色法测定样品中还原糖以及总糖的含量。
该法是半微量定糖法,操作简便、快速,杂质干扰较少。; 三、实验操作
1、样品总糖的水解及提取
准确称取山芋粉1克,放入大试管中,加入10ml 6N HCl和15ml蒸馏水,混匀。在沸水浴加热30min后,用KI-I2溶液检查水解程度。
完全水解后, 冷却并加入酚酞试剂一滴, 以10% NaOH中和至溶液呈微红色, 先用双层纱布过滤, 再用滤纸过滤并定容至100ml。精确吸取上述溶液10ml放入100ml容量瓶、稀释至刻度, 备用。;2、制作葡萄糖标准曲线;将以上各管溶液混匀后,用分光光度计(520nm)进行比色测定,用空白管溶液调零点,记录光密度值,以葡萄糖浓度为横坐标,光密度为纵坐标,绘制出标准曲线。
3、样品中含糖量的测定
取4支大试管,分别按下表加入各种试剂。;测定样品中含糖量时各试剂的用量;将各管混匀后, 按制作标准曲线时同样的操作测定各管的光密度, 在标准曲线上查出相应的糖含量, 按下述公式计算出山芋粉总糖百分含量。
;感谢您的欣赏
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