CHO细胞表达抗体.pptxVIP

CHO细胞表达抗体;基因工程抗体表达体系;CHO（Chinese hamster ocary）;CHO Classification; ;抗体真核高效表达策略;CHO表达载体组成;选择标志基因 ;表达盒; ;PcDNA3.3/Poptivec载体系统;GS系统;;GS（谷氨酰胺合成酶）筛选原理; DHFR系统;四氢叶酸是一碳单位的载体，在核苷酸的合成中起到重要作用。 当叶酸类似物MTX不可逆结合后，阻止四氢叶酸合成。细胞必须产生更多的DHFR才能维持细胞代谢。;第17页/共23页;CHO细胞的培养; 基因合成与质粒构建（密码子优化） 2-3weeks 转化大肠杆菌TOP10 1-2 weeks 转染CHO-s 2days 细胞pool筛选 6-8weeks 单克隆Cell筛选 4-5weeks 单克隆扩增、评估 2-3weeks 扩大培养 ;第20页/共23页;小梯度多次加压有利于最终得到稳定的高表达细胞株。 大幅度加压可以在短期内得到高表达克隆株细胞，但是细胞株表达不稳定，在撤掉筛选压力后，表达水平往往下降。 ;THE　END;感谢观看！