病毒感染的实验诊断课件.pptxVIP

病毒感染的实验诊断课件;病毒感染的实验诊断?; 病毒（Virus）是结构最简单、体积最小的微生物。病毒感染十分常见，约70%~80%的传染病由病毒感染所引起。迄今已证实500多种病毒对人有致病性，其中不少病毒危害极大，如最近流行的SARS病毒。因此尽快获得病毒的实验诊断，对控制病毒的传播、疾病的诊断和防治具有重要的意义。; 病毒性疾病实验诊断的一般原则：特异、敏感、快速和简便。首先根据流行病学和临床特点，初步判断可能感染的病毒；然后根据可疑病毒生物学特点、机体免疫应答和临床过程，以及病人当前所处的时机，确定实验诊断的方法。目前病毒感染的检查主要依靠经典的方法和近来发展起来的分子生物学等方法。前者主要包括病毒分离培养、鉴定及血清学实验；后者主要是核酸杂交与PCR及现代免疫学技术。;;?????? ?;?;?;?;?;?; （二）标本的运送和保存 标本采集后注意无菌、冷冻、保湿、立即送检。 分离培养病毒的标本要尽快送到实验室处理和接种。如不能及时送检，可在4℃冷藏数小时，如需较长时间保存则应置-70℃。放置在-20℃，病毒容易灭活，冻存液中需加入甘油或二甲亚砜等作保护，避免反复冻融使病毒灭活。; 为了抑制细菌生长通常在病毒传送培养基（VTM）中加入抗生素如青霉素100U/l和链霉素100μg/ml，为了抑制真菌的生长加入2.5μg/ml二性霉素B或40μg/ml制霉菌素。; ????? ?; 1.组织培养 （1）??概念 将人或动物离体的活组织或分散的活细胞，在实验室的试管或培养基中，模拟体内的生理条件使之生存和生长，称之为组织培养。 （2）??组织培养的类型 A 器官培养：如气管、肠段。器官保存了原功 能，用于分离某些有器官特异性的病毒。 B 组织块培养：如肝组织块培养肝炎病毒。 C 细胞培养（单层细胞培养）：现广泛使用的 组织培养技术。; （3）细胞培养的种类和方法 根据细胞的来源、染色体特性和传代次数的不同可分为三类： 1．? 原代和次代细胞培养 离体的新鲜组织或器官，机械处理 胰蛋白 洗涤 吹打 酶消化 加入营养液 单个细胞悬液 1-3次 细胞计数 、调整细胞浓度 分装在培养 生长 瓶内培养 形成单层细胞，称为原代细胞培养 ; 胰酶消化 转种新的培养瓶 形成单层 细胞，称为次代细胞培养 ?2．? 二倍体细胞株 原代细胞多次连续传代后仍保持二倍体染色体特性（即含23对染色体），称之为二倍体细胞。传代细胞寿命一般为40~50代，大多数为成纤维细胞,如人胚肺细胞。广泛用于病毒分离和疫苗制备。; 3．传代细胞系 来源于肿瘤细胞或细胞株传代过程的变异细胞。细胞增殖特征和染色体均类似于肿瘤细胞。不宜用于疫苗的制备，常用于病毒的分离和鉴定。 （4）组织培养的特点 优点：A．来源广；B．不受机体免疫因素影响，个体差异小，敏感范围广；C．易于观察病变；D．可用于病毒的分离、鉴定、疫苗的制备；E．易管理，相对比较经济。 缺点：条件要求高，必须要有细胞培养的条件。 ; 2. 鸡胚接种 鸡胚是用于分离粘病毒科、疱疹病毒、痘类病毒的较为理想的材料。 ? （1） 常用接种部位和用途 38-39℃ 新鲜受精卵 5-13天 ; 卵壳; ①? 卵黄囊接种：用于流行性脑炎病毒分 离 ② 羊水腔接种：用于流感病毒、副流感 病毒的初次分离 ③ 尿囊腔接种：用于流感病毒、腺病毒、 腮腺炎病毒分离 ④ 绒毛尿囊膜接种：用于痘病毒、疱疹