生化实验绪论.pptx

生化实验绪论;实验部分：（32学时） 1、表达GFP质粒的提取及双酶切 2、琼脂糖电泳 3、化学转化法感受态细胞的制备、转化及GFP表达菌的筛选 4、表达菌的扩大培养和诱导表达 5、细胞的超声波破碎及硫酸铵分级沉淀 6、透析、柱层析分离GFP 7、SDS测定GFP分子量;实验课的考核方式：考查 实验课成绩评定：平时成绩占30%，包括课堂知识掌握情况等；实验成绩占70%，包括实验操作、实验报告等。;实验课报名要求： 将你的姓名、学院、学科专业、实验课时间发到wenjlei@ 实验课安排在北校区8号楼7层，从第3周开始，每周1~5下午，根据你的情况选择上实验课时间。;生物化学实验技术是生物化学的基本组成部分，也是生物化学建立和发展的基础。 生物化学技术促进了生物学科的建立和发展。揭示了许多生命现象的本质；推动了工业、农业和医疗等的发展。;生物化学实验中，生物分子在溶液进行的生物化学过程与生物化学变化不能直接被观察，需用各种技术和方法来监测生物化学过程。;生物化学技术的发展趋势：仪器分析技术趋向综合化；分离提取技术趋向快速高效和超微量；生物大分子结构分析趋向高精确度、高分辨率。 技术发展迅速：离心技术、层析技术、电泳技术、同位素示踪、HPLC、红外、紫外、圆二色等光谱技术、核磁共振技术、氨基酸分析仪、DNA序列测定仪、DNA合成仪、高效毛细管电泳技术、PCR等。;基本内容： 生物化学实验方法和技术原理，如：生化分离方法、生化分析方法和生化制备方法等。 生化实验：基本实验和综合实验。;课程要求：掌握生化实验方法和技术原理；熟练生化实验的基本操作规程。 目的：获得实验知识和实验技能，为将来的毕业论文和科研奠定基础。;通过生物化学实验应该做到 ①学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，合理地组织安排实验步骤和时间。 ②学会使用各种生物化学实验仪器。分光光度计、离心机、核酸蛋白检测仪、酸度计、电泳装置等。;③观察记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，培养严谨细致的科学作风。 ④掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术。;实验记录;实验报告;实验报告格式 ① 实验目的 ② 实验原理 ③仪器、试剂和实验材料 ④实验步骤 ⑤数据处理 ⑥结果讨论;为了使实验结果能够重复，必须详细记录实验现象的所有细节，仔细观察实验现象常常引起意外的发现，报告并注意分析实验中的真实发现，这是非常重要的科学研究训练。;实验报告使用的语言应简明清楚，实验数据尽可能整理成表格并作图表示。 实验结果的讨论要充分，尽可能多查阅一些有关的文献，运用己学过的知识和生化原理进行深入探讨，提出自己独特的分析和见解，可对实验提出改进意见。;实验室规则;④做好实验记录，及时整理数据，按时上交实验报告。 ⑤仪器使用应遵守操作规程，仪器发生故障或损坏应立即报告教师，不得自己随意检修。;⑥实验过程中注意安全。可能存在的危险：着火、爆炸、中毒、化学灼伤、触电和割伤。实验室内严禁吸烟、吃喝。 ⑦值日生做好实验室的清洁工作。检查并关好水、电、门、窗。;仪器清洗 移液器 缓冲液 纯水;磷酸盐缓冲液 磷酸钠盐在低温时难溶，但配制SDS的缓冲液时，只能用钠盐。 优点：①易配制成各种浓度的缓冲液；②适用的pH范围宽；③pH受温度的影响小；④缓冲液稀释后pH变化小。 缺点：①易与Ca2+、Mg2+及重金属离子生成沉淀；②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。;Tris-HCl缓冲液的优点：对生物化学过程干扰小，不与Ca2+、Mg2+及重金属离子发生沉淀。 缺点：①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大；②温度效应大。③易吸收空气中的CO2。④对某些pH电极发生一定的干扰作用。;无离子水是通过聚苯乙烯磺酸型强酸性阳离子交换树脂和聚苯乙烯季胺型强碱性阴离子交换树脂进行离子交换生产的。 树脂中的低分子有机化合物可能溶于水造成有机物污染，有可能干扰生化实验中的某些反应，也会使水的紫外吸收增加。对紫外吸收要求严格的实验，应选用蒸馏水。;蒸馏水制备多采用石英管加热的硬质玻璃蒸馏水器。在蒸馏水器中加入高锰酸钾1g/L和85％的磷酸1ml可除去有机物。制备不含金属离子的水需用亚沸蒸馏水。 实验中按照排除干扰物质的类型选用水的种类，如：无离子水、普通蒸馏水、二次蒸馏水、亚沸蒸馏水及按特殊要求制备的高纯水等。;当你进入实验室时，要象脱去外衣那样放下你的想象力，因为实验操作中不能有一丁点儿的想象；否则，你对事物的观察就会受影响；而当你翻开书本的时候，你又尽可能展开想象的“翅膀”，否则，你就不可能走在别人前面。;感谢观看！