苯酚硫酸法测多糖含量.pdf

一、硫酸苯酚法测多糖含量 1、试剂配制 ① 浓硫酸：分析纯，95.5% ② 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避 光长期储存。6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配） ③ 5%苯酚：取苯酚100 g，加铝片0. 1 g 和碳酸钠0. 05 g，常压蒸馏,收集182℃ 馏分。称取该馏分 (100%苯酚)5 g，置100 ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀 后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用。 ④ 标准葡聚糖（Dextran,瑞典 Pharmacia）或分析纯葡萄糖。准确称取 20m g 经105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品于 500ml 容量瓶中，蒸馏水溶解定容。 2、制作标准曲线 准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg 于500ml 容量瓶中，加水至刻度，分 别吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8及0.9ml，各以蒸馏水补至1.0ml， 然后加入6% （5%，9%）苯酚0.5ml 及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20min 以 后于490nm 测光密度，以2.0ml 水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数， 纵坐标为光密度值，得标准曲线。 1 2 3 4 5 6 7 8 0 标 准 葡 萄 糖 溶 液 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 0 （mL） 蒸馏水（mL） 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 1.0 6%苯酚（mL） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸（mL） 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 3 注意事项 （1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线， 颜色持久。 （2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数 0.9校 正 μg数。 （3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲 线的校正系数加以校正计算 （4）测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在 0.1——0.3之 间。比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取 2克，仍取0.2ml 样品液，如大 于0.3可以减半取0.1ml 的样品液测定。 （5）正常的反应溶液是深棕色。糖越多颜色越深。注意硫酸的纯度。空白的颜 色很深，说明你的空白中的苯酚被氧化了深红是醌 （苯酚氧化生成）的颜色颜色 过深的话说明你的酚的难度过大，一般是5%但是没遇到你说的那么严重，不是深 红色的做的好的时候颜色很浅，颜色深点也有肯能。 操作的时候有几条你需要注意的，这些对你的检测结果影响极大 1、苯酚需要重蒸，配制的苯酚溶液需要妥善保存。 2、样品检测的时候，向样品中加了苯酚溶液需要迅速摇匀，加入硫酸基本操作： 硫酸沿壁加，最好能旋转比色管，让硫酸能均匀的沿壁流下。 3、加完硫酸需要立即摇匀，前提是塞子要配套，不怕烫热、冷水浴，要准确。