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本发明公开了一种高纯度CRISPR‑Cas9蛋白的酶切方法,第一步、载体构建:合成RGP基因,并克隆至自行改造pGreat‑M载体,完成载体构建;第二步、载体蛋白表达和纯化:使用组合形纯化标签His+MBP+TEV+Cas9进行载体蛋白表达和多步纯化条件优化;第三步、高浓度和纯度纯化方案设计:使用自行优化的培养基培养,MBP柱进行纯化,His‑TEV酶进行酶切,通过Ni柱反筛,分子筛和离子柱多步纯化,并进行HPLC检测;第四步、基因敲除酶切体系条件构建和效率优化:包括SSA活性检测、体外切割活性
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 112961874 A
(43)申请公布日 2021.06.15
(21)申请号 202110213884.9
(22)申请日 2021.02.25
(71)申请人 通用生物系统(安徽)有限公司
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