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2023-06-11 发布于四川
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一种高纯度CRISPR-Cas9蛋白的酶切方法.pdf

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本发明公开了一种高纯度CRISPR‑Cas9蛋白的酶切方法，第一步、载体构建：合成RGP基因，并克隆至自行改造pGreat‑M载体，完成载体构建；第二步、载体蛋白表达和纯化：使用组合形纯化标签His+MBP+TEV+Cas9进行载体蛋白表达和多步纯化条件优化；第三步、高浓度和纯度纯化方案设计：使用自行优化的培养基培养，MBP柱进行纯化，His‑TEV酶进行酶切，通过Ni柱反筛，分子筛和离子柱多步纯化，并进行HPLC检测；第四步、基因敲除酶切体系条件构建和效率优化：包括SSA活性检测、体外切割活性

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 112961874 A (43)申请公布日 2021.06.15 (21)申请号 202110213884.9 (22)申请日 2021.02.25 (71)申请人通用生物系统（安徽）有限公司

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