YC_T 472-2013 烟草及烟草制品 微生物学检验 霉菌计数.docx

ICS 65.160 X 87 备 案 号 ： 3 9 8 5 3 — 2 0 1 3 中 华 人 民 共 和 国 烟 草 行 业 标 准 YC/T 472—2013 烟草及烟草制品 微生物学检验 霉菌计数 Tobacco and tobacco products—Microbiological examination— Enumeration of moulds 2013-02-28发布 2013-03-15实施 国家烟草专卖局 发 布 I YC/T 472—2013 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会(SAC/TC 144/SC1)归口。 本标准起草单位：上海烟草集团有限责任公司、安徽中烟工业有限责任公司、云南烟草科学研究院、 郑州烟草研究院、红塔烟草(集团)有限责任公司、国家烟草质量监督检验中心、湖北中烟工业有限责任 公司、中国烟草总公司青州烟草研究所。 本标准主要起草人：林华清、戚大伟、沙云菲、姚忠达、米其利、奚家勤、马永凯、王浩军、吴风光、 孔凡玉、黎根、张成省、苏杨、陈欢、王毅、吴达、夭建华、舒俊生、楼佳颖、王亮、曾令杰、王嘉乐、唐兴宏。 1 YC/T 472-2013 烟草及烟草制品 微生物学检验 霉菌计数 1 范围 本标准规定了烟草及烟草制品微生物学检验的霉菌计数法。 本标准适用于烟草及烟草制品的霉菌计数。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 根据霉菌生理特性，选择适宜于霉菌生长而不适宜于细菌生长的培养基，采用平板菌落计数法测定 样品中霉菌数。 4 设备和材料 4.1 分析天平：感量0.1 g。 4.2 恒温培养箱：28℃士1℃。 4.3 冰箱：2℃~5℃。 4.4 拍击式均质器。 4.5 加压蒸汽灭菌器：工作压力可达0.15 MPa。 4.6 超净工作台。 4.7 水浴锅：温度可达45℃~65℃,控温精度±1℃。 4.8 无菌玻璃三角瓶：250 mL、500 mL。 4.9 无菌吸管：1 mL (具0.01 mL 刻度)、10 mL (具0.1 mL 刻度)。 4.10 无菌平皿：直径90 mm。 4.11 无菌试管：18 mm×180 mm。 4.12 无菌牛皮纸袋、塑料袋。 4.13 无菌均质袋。 4.14 无菌镊子、剪刀等。 5 培养基和试剂 配制培养基和无菌蒸馏水所用水均应符合GB/T 6682 中三级水规格。 5.1 改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基：成分及制法见附录 A。 2 YC/T 472—2013 5.2 无菌蒸馏水：蒸馏水分装后，121℃加压灭菌20 min。 6 检验程序 霉菌计数的检验程序见图1。 检样 烟草 烟草制品 剪成小块 25 g样品 均质袋+225 mL 无菌蒸馏水 均质袋置于拍击式均质器中，处理3min* 10倍系列稀释 选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，各取1mL 分别加入无菌平皿内 每皿中速加入约15mL 改良马铃薯葡萄糖琼脂培养基 28℃±1℃培养5d 霉菌菌落计数 报告 *均质速度为2;均质力度为标准。每处理30 s 后均质袋换一方向，继续处理。 图 1 霉菌计数的检验程序 3 YC/T 472—2013 7 操作步骤 7.1 样品制备 采样时应避免微生物的污染。样品采集后应尽快检验，否则应将样品置于低温千燥处。 烟草样品：用无菌剪刀将样品剪成小块(约3 cm×3cm), 充分混合后称取25 g 样品置于无菌均质 袋中。 烟草制品(卷烟)样品：称取25 g 样品置于无菌均质袋中。 7.2 样品稀释 7.2.1 将225 mL 无菌蒸馏水(5.2)加入具试样的均质袋中，用拍击式均质器拍打3 min, 制成1:10 样品匀液。 7.2.2 取 1 mL1:10 稀释液(7.2.1)注入有9 mL 无菌蒸馏水(5.2)的试管中，另换一支1mL 无菌吸 管反复吹吸，此液为1:100样品匀液。 7.2.3 按7.2.2制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一支1 mL 无菌吸管。 7.2.4 根据对样品霉变程度的估计，选择2～3个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释的同 时，每个稀释度分别吸取1 mL 样品匀液于两个无菌平皿内。同时，分别吸取