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微生物培养技术;专题一 微生物培养技术;微生物;菌落:;细菌的营养类型 ;一、微生物的分离和纯培养;1、培养基定义:(课本第2页);固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等
半固体培养基可观察微生物的运动
液体培养基常用于发酵工业。;固体培养基;半固体培养基;液体培养基;选择培养基;鉴别培养基;;称量:准确地称取各种成分。牛肉膏比较黏稠,
可以用玻棒挑取,放在称量纸上称量。牛
肉膏和蛋白胨都容易吸潮,称量时动作要
迅速,称后要及时盖上瓶盖。;(2).溶化:
①加水加热熔化牛肉膏
将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯加入少量的
水,加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分 离后,用玻棒
取出称量纸。
②加入蛋白胨和氯化钠,用玻棒搅拌,使其溶解;
③加入琼脂;
④用蒸馏水定容到100mL。
整个过程不断用玻棒搅拌,目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。;待培养基冷却到50 ℃左右时,在酒精灯附近倒平板。;倒平板技术;(二)无菌技术;A、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min
B、巴氏消毒法:70-75 ℃下煮30min
或 80 ℃下煮15min
C、化学药剂消毒法:用酒精进行皮肤消毒;
氯气消毒水源
D、射线消毒法;(1)定义:使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的
微生物,包括芽孢和孢子 。;C、高压蒸汽灭菌:
100kPa、121 ℃下维持
15-30min.
;(三)接种技术(课本第2页);第24页/共46页;稀释涂布平板法;第26页/共46页;第27页/共46页;1、微生物实验室培养的基本操作程序; (1)制备牛肉膏蛋白胨培养基;(2)配制培养基:计算称量;熔化;
调PH;分装;
灭菌; 倒平板
(3)接种:平板划线法;稀释涂布平板法。
(4)培养: 倒置,37℃恒温箱,12和24h。
(5)纯化培养:倒置,37℃恒温箱,24h。
(6)菌种保藏:临时、长期保存法。;菌种的保存;二、培养基对微生物的选择作用;(一)、基础知识;(二)、筛选;常用的刚果红染色法有两种;(1)土壤取样 (2)选择培养(可省略)
(3)梯度稀释 (4)涂布培养
(5)挑选产生透明圈的菌落
(6??微生物培养(纯培养)
;三、测定微生物的数量;(一)测定微生物数量的方法;2、间接计数法:;(一)测定饮用水中大肠杆菌的数目
;1、土壤取样;第42页/共46页;3、样品稀释; 在以尿素为惟一氮源的培养基中加入酚红指示剂,
指示剂变红,就可以准确的鉴定该种细菌能够分解尿素。; 当菌落数目稳定时,选取菌落数在30~300的平板进行计数。在同一稀释度下,至少对3个平板进行重复计数,然后求出平均值,并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。;谢谢观看!
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