CJ 148-2001  城市供水 粪性链球菌的测定.docx

45 CJ/T 148-2001 前 言 本标准由建设部标准定额研究所提出。 本标准由建设部给水排水产品标准化技术委员会归口。 本标准由国家城市供水水质监测网北京监测站负责起草。 本标准起草人：徐欣、金红。 本标准参加验证单位：上海监测站、武汉监测站、天津监测站、广州监测站、深圳监测站及顺德监测 站(省级)。 46 中华人民共和国城镇建设行业标准 城市供水 粪性链球菌的测定 CJ/T 148—2001 Urban water supply— Detection and enumeration of fecal streptococcus 1. 发 醇 法 1. Method by enrichment in liquid medium 1 范围 本标准规定了用发酵法测定城市供水及其水源水中的粪性链球菌。 本标准适用于城市供水及其水源水中粪性链球菌的测定。 2 方法 将水样接种于含叠氮化钠的葡萄糖液态培养基中，叠氮化钠可抑制一般革兰氏阴性细菌的生长，能 在此种培养液中生长的菌体可认为是粪性链球菌推测试验阳性。取推测试验为阳性的培养液移至 Pfrizer 培养基上做确信试验，能在 Pfrizer 培养基上有棕色晕轮的棕黑色菌落生成，则表示粪性链球菌 的证实试验为阳性。 3 试剂和材料 3.1 叠氮化物葡萄糖液态培养基 3.1.1 成分(单强度) 牛肉膏 胰胨或聚胨 叠氮化钠 葡萄糖 氯化钠 蒸馏水 4.5 g 15 g 0.2 g 7.5 g 7.5 g 1L 3.1.2 制法 将上述各成分于蒸馏水中加热溶解，调节pH 值使其灭菌后为7.2±0.1,分装于试管内，高压灭菌 器121℃灭菌15 min。 上述各成分取2倍量为双倍强度培养基。 3.2 Pfrizer 选择性肠球菌琼脂培养基 3.2.1 成分 蛋白胨 酵母膏 3号胆盐 氯化钠 20.0 g 5.0 g 10.0 g 5.0 g 中华人民共和国建设部2001-07-17批准 2001- 12-01 实施 CJ/T 148—2001 47 柠檬酸钠 七叶苷 柠檬酸铁铵 叠氮化钠 琼脂 蒸馏水 1.0g 1.0 0.5 0.25 15.0 1L g g g g 3.2.2 制法 将上述各成分于蒸馏水中加热溶解，调节pH 值使其灭菌后为7.2士0.1,分装于试管内，121℃灭菌 15 min。 4 仪器 4.1 试管：18 mm×180 mm。 4.2 刻度吸管：1 mL 、10 mL。 4.3 恒温培养箱。 4.4 高压蒸气灭菌器。 4.5 酒精灯。 4.6 量筒。 4.7 培养皿。 4.8 冰箱。 5 测定步骤 5.1 推测试验 5.1.1 接种不同量的被检水样于一组叠氮化物葡萄糖液态培养基中；接种1mL 或更少的水样于单倍 强度的液态培养基10 mL 中，接种10mL 的水样于双倍强度的液态培养基10 mL 中，接种量的多少与 数目应依水样的特性而有所变化，接种量一般为1 mL 的十进倍数。 5.1.2 接种过的试管应在35℃±0.5℃的恒温培养箱内培养，24 h±2h 后检查每一支试管是否有浑 浊，如果浑浊不明显，应继续培养到48 h±3 h 后进行检查。 5.2 确信试验 经 过 2 4 h 或 4 8 h 培养而显示浑浊的所有的叠氮化物葡萄糖液态培养基试管要进 一 步做确信 试验。 从推测试验为阳性的试管内取一些培养液，划线转移到培养皿中，其内盛有 pfrizer 选择性肠球菌 琼脂培养基(3.2),培养皿在35℃士0.5℃倒置培养24 h±2h, 具有棕色晕轮的棕黑色菌落生成则显示 粪性链球菌确实存在。 6 最大可能数(MPN 值)的计算及记录 根据确信试验的阳性管数查最可能数(MPN) 表(见表1),即可得100 mL 水样中的粪链球菌的最 可能数。 对表中未被列人的组合，以及当试管数和稀释情况不同时，可用简单公式(1)计算： …… (1) CJ/T 148-2001 48 表 1 最可能数(MPN) 表 ( 接 5 份 1 0mL 水样、5份1mL 水样、5份0.1mL 水样时，不同阳性及阴性 情况下100mL水样中细菌数的最可能数和95%可信限值 出现阳性份数 每100mL 水样中 细菌的 最可能数 95%可信限值 出现阳性份数 每100mL 水样中 细菌的 最可能数 95%可信限值 10 mL 管 1 mL 管 0.1 mL 管 下 限 上 限 10 mL 管 1 mL 管 0.1 mL 管 下