CJ 150-2001  城市供水 致突变物的测定 鼠伤寒沙门氏菌哺乳动物微粒体酶试验.docx

58 CJ/T 150—2001 前 言 本标准由建设部标准定额研究所提出。 本标准由建设部给水排水产品标准化技术委员会归口。 本标准由国家城市供水水质监测网天津监测站负责起草。 本标准起草人：张旭东、李嫱。 本标准参加验证单位：北京监测站、上海监测站、深圳监测站、武汉监测站、昆明监测站。 59 中 华 人 民 共 和 国 城 镇 建 设 行 业 标 准 城市供水 致突变物的测定 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验 CJ/T 150—2001 Urban water supply— Determination of mutagenesis— Salmonella typhimurium/Mammals microsomal enzyme test 1 范围 本标准规定了用鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验测定城市供水的致突变性。 本标准适用于城市供水及其源水水质致突变性的测定。 本标准规定以2 L 为接种的最高检测水样体积。 2 方法 人工诱变鼠伤寒沙门氏菌突变株(即组氨酸营养缺陷型),在无组氨酸的培养基上不能生长，如受到 致突变物的作用，使其基因发生变化而回复突变为原来的野生型，即使在缺乏组氨酸的条件下也能生长 (如下图所示)。其中一些致突变物为直接致突变物。另外一些为间接致突变物，即需代谢活化后具有致 突变性。 3 试剂和材料 3.1 营养肉汤 牛肉浸膏 5 g 蛋白胨 10 g 氯化钠 5 g 蒸馏水 1000 mL 将上述成分混合后，加热溶解，用饱和 NaOH 溶液调节 pH 值至7.2,分装于试管中，每管10 mL。 经121℃高压湿热灭菌20 min。4℃ 冰箱保存，供增菌使用。(保存期7天) 3.2 V-B 液 柠檬酸(C?H?O? ·H?O) 10 g 磷酸氢二钾(K?HPO? ·3H?O) 65.5 g 磷酸氢铵钠(NaNH?HPO? ·4H?O) 17.5 g 硫酸镁(MgSO? ·7H?O) 1.0g 蒸馏水 500 mL 将上述试剂在少量蒸馏水中溶解后，稀释至500 mL。 硫酸镁水溶液在最后缓慢加入以防止产生沉 淀，经滤纸过滤后，于4℃冰箱保存。 3.3 底层培养基 中华人民共和国建设部2001-07-17批准 2001-12-01 实 施 CJ/T 150—2001 60 葡萄糖 V-B 液 琼脂 蒸馏水 将 V-B 液用饱和NaOH 20 g 100 mL 17 g 900 mL 溶液调节pH 值至7.0。另将葡萄糖溶于100mL 蒸馏水中(溶液变黄者弃 去重配),两者于115℃灭菌10 min。 琼脂于800 mL 蒸馏水中煮沸溶化，121℃灭菌20 min,待其凉至 80℃左右，将前两者倒入混匀。浇制平板，每皿25 mL。 于4℃冰箱中可保存14天。 3.4 0.5 m mol/L-组氨酸-0.5 m mol/L-生物素溶液 成分 L-组氨酸(FW155.7) 7.8 mg [ 或 L-组氨酸盐酸盐(FW209.63) 10.5 mg] D-生物素 12.4 mg 蒸馏水 100 mL 混匀溶解，于4℃冰箱中保存。 3.5 0.1 mol/L-组氨酸溶液 L-组氨酸(FW155.7) 1.56 g [或 L-组氨酸盐(FW209.63) 2. 10g] 蒸馏水 100 mL 混匀溶解，于4℃冰箱中保存。 3.6 营养琼脂 琼脂 16 g 营养肉汤