CJ 149-2001  城市供水 亚硫酸盐还原厌氧菌(梭状芽胞杆菌)孢子的测定.docx

51 CJ/T 149—2001 前言 本标准由建设部标准定额研究所提出。 本标准由建设部给水排水产品标准化技术委员会归口。 本标准由国家城市供水水质监测网广州监测站负责起草。 本标准起草人：林朝晖。 本标准参加验证单位：北京监测站、上海监测站、天津监测站、深圳监测站、成都监测站及顺德监测 站(省级)。 52 中 华 人 民 共 和 国 城 镇 建 设 行 业 标 准 城市供水 亚硫酸盐还原厌氧菌 (梭状芽胞杆菌)孢子的测定 CJ/T 149--2001 Urban water supply— Determination of the spores of sulfite-reducing anaerobes (clostridia) 1. 液 体 培 养 基 增 菌 法 1. Method by enrichment in liquid medium 1 范围 本标准规定了用液体培养基增菌法测定城市供水及水源水中亚硫酸盐还原厌氧细菌孢子。 本标准适用于城市供水及水源水中亚硫酸盐还原厌氧细菌孢子的测定。 2 方法 取一定体积的水样。首先用加热法选择水样中的孢子，加热时间应足以杀死营养型细菌。将水样接 种于培养液中，然后于37℃士1℃厌氧培养44 h±4h。 由于亚硫酸盐还原厌氧细菌能把培养液中的亚 硫酸盐还原为硫化铁(I) 是黑色沉淀，则培养液变黑为阳性。 3 试剂和材料 3.1 单一强度的基本培养基 3.1.1 成分 蛋白胨 牛肉膏 酵母浸膏 淀粉 乙酸钠(含水) L-半胱氨酸盐酸盐 葡萄糖 蒸馏水 10 g 10 g 1.5g 1 g 5 g 0.5 g 1 g 1000 mL 3.1.2 制法 将蛋白胨、牛肉膏、乙酸钠和酵母浸膏混合于800 mL 水中。 用200mL 蒸馏水制备淀粉液，步骤如下：把淀粉置于少量的冷水中调成浆糊状。把剩下的水加热 至沸，在搅拌中慢慢倒人浆糊状淀粉中。将此淀粉液与前述800 mL 混合液混合，加热至沸，使全部 溶解。 中华人民共和国建设部2001-07-17批准 2001-12-01 实施 CJ/T 149—2001 53 最后再加入葡萄糖和L-半胱氨酸盐酸盐，使其溶解。 用 NaOH(1mol/L) 溶液调pH 值至7.1～7.2,分装10 mL 培养基溶液到25 mL 带盖螺口玻璃瓶 中，冷却后，拧紧瓶盖。 121℃士1℃高压灭菌15 min。 3.2 双强度基本培养基 制备双强度基本培养基的过程与单一强度的基本培养基(3.1)同，但水的体积要减少一半。将 10mL 或 5 0 mL 双强度培养基溶液分别将在25 mL 或100 mL 螺口瓶中，121℃±1℃高压下灭菌 15 min。 3.3 亚硫酸钠(Na?SO?) 溶液 4g 无水亚硫酸钠溶于100mL 水中，用0.2 μm 滤膜过滤除菌。保存温度2℃~5℃。保存期14天。 3.4 柠檬酸铁(C?H?O?Fe) 溶液 7g 柠檬酸铁溶于100mL 水中，用0.2 μm 滤膜过滤除菌。保存温度2℃~5℃。保存期14天。 3.5 完全培养基 3.5.1 分析时，将等体积的亚硫酸钠溶液(3.3)和柠檬酸铁溶液(3.4)混合。 3.5.2 在每瓶单一强度培养基中各加入0.5 mL 的混合溶液(3.5.1),此培养基应重新在沸水水浴上 加热15 min 并冷却。 3.5.3 在每瓶10mL 的双强度培养基中各加入0.4 mL 的混合溶液(3.5.1),50 mL 的双强度培养基 中各加入2 mL 的混合溶液，此培养基也应重新在沸水水浴上加热15 min 并冷却。 4 仪器 4.1 100 mL 和25 mL 螺口带盖玻璃瓶。 4.2 50 mL、100 mL、10 mL 和 1 mL 移液管。 4.3 恒温水浴锅。 4.4 试管(150 mm×13 mm)。 4.5 接种环。 4.6 恒温培养箱(保持温度37℃±1℃)。 4.7 细菌过滤器。 5 测定步骤 5.1 孢子的选择 水样在试验前须放置于75℃±5℃水浴锅中，加热15 min,用同样带盖螺口瓶子作空白，检查加热 温度。 5.2 接种与培养 将 5 0mL 水样置于含50 mL 双强度完全培养基(3.5.3)的100 mL 螺口瓶中。 向5个含有10 mL 双强度完全培养基(3.5.3)的25 mL 螺口瓶中，加入10mL 水样。 向5个含有10 mL 单一强度完全培养基(3.5.2)的25 mL 螺口瓶中，加入1 mL 水样。 如果有必要，