基础医学核酸疫苗及免疫研究进展.pptxVIP

基础医学核酸疫苗及免疫研究进展; 疫苗是将病原微生物（如细菌、立克次氏体、病毒等）及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。 人们将多种灭活或减毒疫苗称为第一代疫苗。 将用基因工程的方法研制的亚单位疫苗称为第二代疫苗。 理想疫苗应具备的特征有：安全、廉价、热稳定性好，含有多种具有保护作用的免疫原，最好是一次口服即可生效。目前前两代均不能满足上述标准。故基因疫苗应运而生。;;关于核酸免疫的国际会议;定义;;基因疫苗的构建;基因疫苗的构建;基因疫苗的构建;基因疫苗的构建;2.抗原基因与载体的连接;粘性末端连接;平末端连接;基因疫苗的构建;基因疫苗的构建;基因疫苗的构建; 由于这个过程实际上是相当复杂的，所以人们对一些具体的细节并不清楚。下面通过对基因疫苗经过肌肉组织和黏膜免疫的抗原呈递途径来说明基因疫苗的工作原理。;第18页/共92页;基因疫苗经黏膜和皮肤组织免疫的抗原呈递;;;携带基因疫苗重组减毒沙门氏菌诱发机体免疫应答的机制 ;核酸疫苗的优缺点;核酸疫苗的应用现状;发展前景;核酸疫苗研究进展; 一、概 述; 核酸疫苗又称基因疫苗或DNA疫苗，就是把外源基因克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组的质粒基因直接免疫机体 ，使外源基因在活体内表达，产生的抗原激活机体的免疫系统，引发免疫反应。 ;（二）DNA疫苗的构成： 1. 抗原表达基因 2. 真核细胞启动子（如CMV I.E启动子） 3. Poly A 终止序列（如来自SV40 或 BGH基因） 4. 原核细胞选择标志（如青霉素抗性基因） 5. 增强免疫原性的核苷酸序列（如非甲基化CpG二核苷) ;第30页/共92页; 二、DNA疫苗载体;1. 裸DNA疫苗：质粒、 MIDGE载体 2. 病毒载体： 天花病毒、腺病毒 3. 细菌载体：减毒活菌苗和繁殖缺陷细菌，如伤寒菌苗、肠炎沙门氏菌苗、志贺氏菌苗、单核细胞增生李斯特菌苗和小肠炎耶尔森氏菌苗 4. 微粒包裹载体：金颗粒(gold particle)、脂质体(liposomes)、聚丙交酯-聚乙交酯（PLGA）、藻酸盐微粒(alginate)、和纳米微粒(nanoparticles);Various methods of gene delivery; 三、DNA疫苗与常规疫苗的比较;;;;核酸疫苗与第一、二代疫苗相比具有如下优势：;四、核酸疫苗诱导的免疫反应;第40页/共92页;第41页/共92页;Immune mechanisms induced by inoculation with naked DNA;Depiction of the mechanisms of generation of antigen-specific humoural and cellular responses.;五、核酸疫苗的构建;;;培养Vero-E6细胞;;;作为DNA免疫的注射样品。;实验动物的DNA免疫;细胞因子的动态变化;淋巴细胞增殖反应:;免疫鼠血清的抗NP抗体的测定:;血清抗NP抗体滴度的测定:;六、核酸疫苗的优化;Effects of CpG motifs on various cells;Generation of Immunity after Inoculation of DNA Plasmid with GpG Motifs;;3、基因佐剂 的应用 ; ;;;;血清特异性抗体的检测结果;;;;;血清的抗NP抗体的测定结果;七、核酸疫苗的安全性问题 ;1、有关基因整合的研究; 尚无证据证明以自身表达质粒的形式存在于染色体外的外源DNA能整合入宿主染色体中。 其整合发生率较自然整合发生率低3个数量级，另鲑鱼精DNA已经以一种非处方药形式经口服或注射等多种方式使用了数十年，却未见任何明显的副作用。 ;2、关于免疫耐受的研究 ; 免疫2天的小鼠产生耐受 免疫出生24小时内的小鼠，与在成年小鼠中观察到的没有区别。 HBsAg转基因小鼠进行DNA免疫，使已经建立的对HBsAg的特异性免疫耐受状态被打破，使小鼠产生抗HBsAg的特异性抗体。 ;3、关于自身免疫性疾病的研究 ; 4、其它不良反应 ; 八、DNA疫苗的应用; （一）感染性疾病 （二）肿瘤 （三）自身免疫病与变态反应 ;表 病毒的DNA疫苗;病毒;表 细菌的DNA疫苗;表 寄生虫的DNA疫苗;肿瘤抗原可被归为四类： ⑴ 个体肿瘤具有的独特抗原 ⑵ 组织学相近肿瘤细胞具有的共同的抗原 ⑶ 组织分化抗原 ⑷ 正