隐球菌临床推广.pptxVIP

第1页/共41页隐球菌临床推广第2页/共41页三 产品介绍 适用科室及临床意义 相关标准四一二 隐球菌病感染诊断现状第3页/共41页简 介隐球菌为圆形菌体，外周有荚膜，内有反光孢子，但无菌丝。隐球菌属已知有37个不同的种，但具致病性的多为新型隐球菌，其特点是菌体由一层很厚的多糖荚膜所包被。 新型隐球菌主要包括新生变种、格特变种等第4页/共41页流行病学38个 ICUs of 27个意大利医院384 例真菌感染 (318例侵袭性念珠菌感染；63例霉菌感染；3例隐球菌感染)Tortorano AM et al. Mycoses. 2011, 55: 73–79.第5页/共41页宿主因素 美国感染病学会的“隐球菌病治疗临床实践指南（2010 年更新）”中指出，隐球菌病的易感人群主要包括：HIV感染者器官移植患者接受大剂量皮质类固醇或单克隆抗体（如阿仑单抗、英夫利昔单抗）和/或其他免疫抑制剂治疗的患者其他无基础疾病的患者John R. Perfect, etc. Clinical Infectious Diseases 2010; 50:291–322第6页/共41页流行病学随着AIDS患者的增多，各种机会性感染的发病率也随之上升，新型隐球菌成为继白色念珠菌之后最常见的机会性感染真菌，其在HIV中的感染率已达8.5%。隐球菌性脑膜炎发生率和死亡率在发达国家达到10-30%， 在发展中国家可达到50-100%。早期隐球菌感染临床表现缺乏特异性，脑脊液变化不典型，但是当发展为隐球菌性脑膜炎时，死亡率可达到20%。早期、快速、准确地诊断很有必要第7页/共41页现有检测手段墨汁染色（菌体）真菌培养（活菌）ELISA（荚膜多糖抗原）乳胶凝集法（荚膜多糖抗原）胶体金法 （荚膜多糖抗原）第8页/共41页现有检测手段1. 印度墨汁染色： 敏感性差，阳性检出率很低2. 脑脊液或血液培养（金标准）： 阳性检出率低，培养（2-10天）及鉴定时间长，易误诊3. 抗原检测试验： 脑脊液和血清样本抗原检测的敏感性可达到97%和87%*，能实现早期快速诊断* Tyler Warkentien, MD. Int J STD AIDS. 2010 October ; 21(10): 679–684.第9页/共41页隐球菌荚膜多糖抗原隐球菌荚膜多糖抗原GXM (Glucuronoxylomannan, GXM) ： 由3种不同的单糖聚合而成 是引起病理变化的主要毒性因子 在菌体生长和繁殖过程中，GXM不断分泌到胞外 通过发挥免疫抑制作用和免疫调理作用影响宿主免疫系统荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，可以作为隐球菌感染的诊断依据 Oscar Zaragoza, etc..Adv Appl Microbiol. 2009, 68: 133–216第10页/共41页一三 产品介绍 临床意义及适用科室 相关标准四二 隐球菌病感染诊断现状第11页/共41页隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）原理第12页/共41页隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）试剂盒组成隐球菌抗原检测试纸条50条 样本稀释液滴定液阳性对照稳定性/储存方法2年有效期室温储存第13页/共41页特 点无需样本预处理10分钟得到结果定性或半定量测定结果客观血清，脑脊液，血浆第14页/共41页样本收集及制备按照无菌操作收集脑脊液、血浆和血清样本。样本最多可以在 2-8℃放置 72 小时。不反复冻融的情况下，样本可以在-20℃以下保存更长时间。样本在运输过程中应保持在 2-8℃或者-20℃以下。第15页/共41页定性检测操作步骤简单5步，10分钟得到结果第16页/共41页定性检测结果 注意：若对照条带未出现，则说明该检测无效，应重新检测。第17页/共41页半定量检测操作步骤1、以 1:5 作为初始稀释浓度，依次 1:2 稀释至 1:2560。 分别放置于10 个微离心管中并编号1-10。2、向 1 号试管中加入 4 滴样本稀释液。3、分别向标号 2-10 的试管中加入 2 滴滴定液。4、将 40 μL 样本加入 1 号试管并混匀。5、从 1 号试管中吸取 80 μL 样本混合液转移至 2 号试管并混匀，依次进行稀释直至 10 号试管。6、10 号试管中吸取 80 μL 样本混合液并丢弃以保证试管内最终体积为 80 μL。7、将试纸条的白端分别没入试管中。8、等待 10 分钟，读取并记录实验结果。第18页/共41页半定量检测操作步骤第19页/共41页半定量检测操作步骤-2第20页/共41页半定量检测(滴度)结果 对于半定量滴定检测，患者的滴度应报告为产生阳性结果的最高稀释度。第21页/共41页质量控制阳性对照：将 1 滴样本稀释液加入试管中，再加入 1 滴隐球菌抗原阳性对照。阴性对照为：将 2 滴样本稀释液加入试管