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第1页/共44页微生物检验相关知识第2页/共44页微生物检验相关知识第3页/共44页微生物定义及特点 微生物：是一群形体细小、结构简单、人肉眼看不见，必须借助于光学显微镜、电子显微镜放大几百倍、几千倍甚至几万倍才能看到的生物分布广、种类多适应强、易变异微生物体积小、面积大代谢强、繁殖快第4页/共44页非细胞形态原核生物病毒霉菌、酵母菌真核生物蓝细菌细菌、支原体、衣原体藻类原生动物细胞形态微生物微生物分类第5页/共44页细菌分类形态分球状、杆状、螺旋状细胞结构（染色）分G+、G-细菌需氧、厌氧、兼性厌氧呼吸类型分代谢类型分自养型 、异养型第6页/共44页细菌形态球状杆状 弧形或螺旋形第7页/共44页细菌结构（染色）G-G+第8页/共44页细菌结构基本结构：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质特殊结构：荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢第9页/共44页标本的采集与处理血液、骨髓、脑脊液标本痰液标本尿液、粪便标本眼耳鼻喉拭子、脓液及其他无菌标本第10页/共44页标本的采集与处理1、所有标本的采集、运送和处理应在无菌操作，防止污染原则下认真进行。2、已采集标本都应置于防漏、密闭的容器中运送。已采集标本，常规性细菌学检验，不超过1h送实验室。保存在4℃也不能超过24h。第11页/共44页标本的采集与处理3、每份标本都应标记患者姓名、化验单联号、标本来源、检验目的、日期及相关临床信息。 收到标本认真查对，看标本留取是否合格。4、避免来自寄生菌的污染，应当保证每份标本代表感染过程。如来自皮肤、呼吸道的正常菌群过早、过度生长，会干扰培养结果。分离时应区别标本中是常居菌群的污染还是致病菌。第12页/共44页标本的采集与处理5、分离细菌的目的：查找与疾病相关的微生物及其对抗生素的敏感性，帮助临床诊断、治疗、预后和流行病学的调查。6、如疑似对低温敏感的淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌感染标本应立即处理。脑脊液、生殖道、眼睛、内耳标本决不可冷藏。第13页/共44页血液、骨髓、脑脊液标本血培养仪所用培养基的种类： 需氧（成人、儿童）、厌氧、真菌培养基。标本用量： 采血量：成人8-10ml，儿童1-3ml； 骨髓用量：1-3ml； 真菌：1-5ml； 厌氧菌：3-10ml 。第14页/共44页血液、骨髓、脑脊液标本培养仪上阳性报警标本要及时处理：消警、登记报警时间、用注射器抽取培养液接种平板，血平板分离各类细菌特别?-溶血链球菌，肺炎链球菌；巧克力平板于CO2环境分离嗜血杆菌、奈瑟菌。真菌培养接种两个TTC-沙氏平板，分别放室温22℃及35℃孵育24-48h。均需分区划线。第15页/共44页血液、骨髓、脑脊液标本然后涂片革兰染色镜检，把镜检结果及时电话通知临床医生，并填写初检结果临床通知单。常规培养5天，认为阴性者，报告无菌生长， 正常人的血液、骨髓是无菌的，标本中检出 细菌，都应视作病原菌 ﹝需排除污染﹞第16页/共44页血液、骨髓、脑脊液标本脑脊液：涂片查抗酸杆菌：脑脊液以4000r/min离心30min，取沉淀物涂片，做抗酸染色。涂片查新型隐球菌：将脑脊液离心沉淀物进行墨汁染色，在黑色背景中见到菌体周围有透明荚膜，有时可见出芽的酵母菌。第17页/共44页血液、骨髓、脑脊液标本脑脊液培养用血培养仪，阳性报警标本处理同血培养。注意：涂片检到平面相对、成双排列G—C,可报告“找到G—C, 形似脑膜炎奈瑟菌”。巧克力平板于CO2环境分离脑膜炎奈瑟菌和嗜血杆菌。第18页/共44页痰液标本痰应用冷开水漱口咳痰，2h内送实验室。 培养前的处理：向痰液内加等量的胰酶溶液，放置35℃ 30min使痰均质化。然后挑选痰液中脓性或带血部分涂片直接镜检看白细胞和上皮细胞及真菌，待干后革兰染色检查细菌和真菌。标本信息及镜检结果都要登记。第19页/共44页痰液标本痰涂片目的有二：其一为确定标本是否适合做细菌培养。符合要求的痰标本应在低倍视野中白细胞≥25个，上皮细胞≤10个。其二是初步判定是否有病原菌存在。第20页/共44页痰液标本痰直接涂片查细菌、真菌：挑选痰液中脓性或带血部分，涂成均匀薄片，进行革兰染色，镜检。痰涂片查抗酸杆菌：把痰前处理液加入痰标本中，两者比例约2：1，混合均匀，放室温静置10-20min，待粘液完全液化，倒试管离心3000r/min5-10min，取沉淀物涂片抗酸染色镜检。第21页/共44页痰液标本培养基选择：血平板分离各类细菌特别?溶血链球菌，肺炎链球菌。加万古巧克力于CO2环境分离嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌。麦康凯分离革兰阴性杆菌。真菌培养接种两个TTC-沙氏平板，分别放室温22℃及35℃孵育24-48h。均需分区划线。第22页/共44页尿液、粪便标本尿液中段尿采集：清洁外阴及尿道口周围，自然排尿，让尿流不间停，截留中段尿不少于1ml。2h内送交实验室，在4oC