质谱发展历史基础知识.pptxVIP

质谱发展历史基础知识;什么是质谱仪?;;第一节 进样部分;第二节　离子源;EI的优缺点;FBI快速原子/离子轰击离子源Fast Atom/Ion Bombardment;第8页/共95页;FBI优缺点; C: MALDI 激光解吸附离子源 Matrix-Assisted laser Desorption/Ionization;第11页/共95页;第12页/共95页;常用基质;常用基质结构; MALDI的优缺点;Sample submission In solution, as concentrated as possible, volume 10-20 ul Minimum Concentration 10 pmol/microliter Use 200ul PCR-style eppendorf tubes ;D: ESI离子源Electrospray Ionization;第18页/共95页;NANO-ESI喷雾照片;ESI特点;电荷数和质量数的计算;ESI优缺点;E: 其他离子化方式;第三章 质量分析器（过滤器）;D、分辨率 质谱分辨不同质荷比离子的能力 分辨率R=M/ΔΜ a =M?/(M?－ M?) b a 公式定义为单峰的质荷比与其半峰宽之比 b公式定义为相邻的相交10％的两个峰M? M? 按a 式计算的分辨率约为b式计算的两倍。;不同分辨率谱图效果;E：分子量的表述方式;2、化学平均分子量M 根据同位素质量及丰度计算出平均质量，所有元素的平均质量给出分子的平均质量。 3、最高峰质量 即未分辨开质谱峰最高处的质量数。 表述方式要看分子量及分辨率而定，当m/z高时单同位素峰已不是丰度最大的峰， m/z 8000时Μ与最高峰质量趋于一至。;第29页/共95页;第二节 质量分析器的种类; ;四极杆质量分析器的 优点;B、离子阱质量分析器; 离子阱质量分析器;C、飞行时间质量分析器 Time-of-Flight Analyzer;;TOF对真空度的要求非常高10??Torr MALDI源一般同时联接Time-of-Flight Analyzer和RETOF;D、傅立叶回旋共振质量分析器fourier Transform-Ion Cyclotron Resonance;几种质量分析器的比较;第三节：质量分析器的串联;空间串联质谱仪;第42页/共95页;几种检测方式;三级四极杆的几种扫描模式;B、三级四极杆飞行时间质谱仪Quadrupole time of flight;C、飞行时间飞行时间质谱仪Time-of-flight/time-of-flight;时间串联质谱仪;第48页/共95页;B、傅立叶回旋共振质谱仪Fourier transform-ion cyclotron resonance;几种串联质谱优缺点对比;第四章 检测器;二、光电转换倍增器（闪烁计数器）;三、HED(High-Energy Dynode Detector);四、FT-MS;第五章、质谱在生物学中的应用;;The proposed mechanism of formation of b and y-type ions ;三、肽序列标签技术;四、O标记从头测序技术;五、磷酸化蛋白质的鉴定;B、串联质谱进行母离子、中性丢失 扫描，分析含HPO3的肽段产生的特征离子，直接从混合肽段中找出磷酸化肽段。;C、PRD-MALDI-MS用源后衰变技术寻找质量数少80Da或98Da的肽段来判断磷酸肽。;D、用IMAC技术分离/富集磷酸肽对比前后质谱变化寻找磷酸肽。 IMAC immobilized metal affinity固相金属亲和色谱。IMAC 对磷酸肽有高选择结合能力，富集后用高PH或磷酸盐洗脱后测质谱。;E、磷酸化位点的确定;F、磷酸化定量分析;2、同位素亲和标记法;六、糖基化蛋白的鉴定;B、糖基化位点的确定;C、用凝集素直接提取含糖肽段，再结合质谱技术分析;七、质谱在蛋白质组学中的应用;第71页/共95页;优缺点;Why 2D LC/MS?;Then why SCX/RP/MS?;;(7) Sample Considerations for LC/MS