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流式基本介绍第1页/共51页第2页/共51页To help all people live healthy lives1973年BD推出世界第一台流式细胞仪 FACS I（Fluorescence Activated Cell Sorter）1980年中国的第一台流式细胞仪FACS II生物学、免疫学、遗传学、药理学、肿瘤学、血液学、临床检验等领域FACS流式细胞仪市场占有率：全球75%，中国70%第3页/共51页台式机 —— FACSCalibur双激光：488nm/635nm四荧光六分析参数动化程度高分析速度快灵活的设计细胞分选系统 细胞富集系统第4页/共51页大型机 —— FACS Vantage SE多激光多波长八特征参数设计灵活高速分选单细胞点对点分选第5页/共51页流式细胞术的基本概念流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性，并加以定量的技术，同时可以对特定群体加以分选研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量第6页/共51页流式细胞仪仪器结构液流系统光学系统 激光光源 光收集系统电子系统 光电转换 数据处理系统细胞分选系统第7页/共51页流式细胞仪的检测范围细胞结构细胞大小细胞粒度细胞表面面积核浆比例DNA含量与细胞周期RNA含量蛋白质含量细胞功能细胞表面/胞浆/核的特异性抗原细胞活性细胞内细胞因子酶活性激素结合位点细胞受体第8页/共51页流式细胞仪的检测信号散射光信号FSC，前向角散射光，代表细胞大小SSC，侧向角散射光，代表细胞粒度第9页/共51页流式细胞仪的检测信号荧光信号使用荧光标记的单克隆抗体染色，做多色分析荧光信号的强弱，反映了细胞抗原的表达含量第10页/共51页双激光立体空间激发系统第11页/共51页双激光立体空间激发系统Laser1Laser2第12页/共51页信号脉冲处理Pulse Processing（DDM）第13页/共51页DDM (Doublet　Discrimination Module) 双粘体辨别—DNA分析的解决之道 通过信号脉冲（FL2-W和FL2-A）分析区别实体组织标本中的粘连细胞，最大程度减少假阳性第14页/共51页流式细胞仪的应用淋巴细胞免疫分型淋巴细胞亚群分析CD4绝对计数HIV的诊断与研究淋巴细胞 CD4/CD8分析CD4绝对计数T细胞活化细胞移植的交叉配型和免疫状态监测第15页/共51页流式细胞仪的应用免疫功能和免疫调控的研究淋巴细胞和单核细胞的活化细胞因子的研究淋巴细胞的增殖树突状细胞的研究HLA-B27检测第16页/共51页流式细胞仪的应用白血病和淋巴瘤免疫分型残留白血病造血干细胞计数PNH诊断网织红细胞分析血小板分析血小板膜糖蛋白分子的表达血小板活化网织血小板分析第17页/共51页流式细胞仪的应用细胞周期分析肿瘤相关基因表达的研究多药耐药基因的研究细胞凋亡的分析凋亡细胞的分析凋亡相关蛋白的分析第18页/共51页淋巴细胞亚群分析使用特异的单克隆抗体，进行多色分析，同时分析淋巴细胞上多种抗原的表达，可以将淋巴细胞亚群区分开，进行定量分析各淋巴细胞亚群的百分含量淋巴细胞亚群的绝对计数第19页/共51页临床意义了解在不同情况下体内免疫功能状态辅助临床疾病的诊断探索疾病的发病机理、病程、预后监测、指导临床治疗方案免疫系统疾病免疫缺陷病，AIDS移植病人排斥反应或移植物抗宿主反应的检测肿瘤病人化疗后免疫力检测第20页/共51页淋巴细胞亚群分析根据功能，淋巴细胞主要分为B淋巴细胞（CD19+），与体液免疫有关T淋巴细胞（CD3+），与细胞免疫有关NK细胞（CD3-CD16+56+），行驶免疫监控功能根据CD4、CD8表达，T淋巴细胞又分为T辅助/诱导细胞（CD3+CD4+）T抑制/细胞毒性细胞（CD3+CD8+）Th/Ts升高：自身免疫性疾病（类风湿性关节炎、SLE）Th/Ts降低：病毒感染、恶性肿瘤、再生障碍性贫血活化T淋巴细胞：HLA-DR、CD38等第21页/共51页SimulTEST IMK-Lymphocyte淋巴细胞双色分析使用双色分析试剂样本使用EDTA抗凝全血，用血量600uL使用SimulSET自动软件，进行样本的获取和分析SimulSET软件自动做质量检查，帮助发现样本运输、处理等过程中造成的错误医生报告T、B、NK淋巴细胞及TH、TS百分含量和H/S比值，并报告参考值范围第22页/共51页SimulTEST IMK-Lymphocyte淋巴细胞双色分析CD45/CD14，Leucogate：确定淋巴细胞门，评估门的有效性，并自动计算淋巴细胞亚群占门内淋巴细胞的比例，排除门内杂细胞的干扰?1/?2a，