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第1页/共8页实验三外周血单个核细胞分离第2页/共8页实验三 外周血单个核细胞分离第3页/共8页实验目的掌握外周血单个核细胞分离的原理与操作掌握外周血单个核细胞的概念第4页/共8页实验原理 人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）包括淋巴细胞和单核细胞。第5页/共8页单个核细胞的体积、形态和比重与外周血其他细胞不同。因此利用一种介于1.075-1.090之间的聚蔗糖-泛影葡胺（ficoll-hypaque）分离液作密度梯度离心，离心后不同比重的血细胞在分离液中呈梯度分布,从而分离出PBMC。第6页/共8页人血液中各种细胞的密度如下：红细胞：1.093白细胞：1.092淋巴细胞和单核细胞：1.075-1.090血小板：1.030-1.035F/H= 1.077±0.001第7页/共8页实验步骤1.用抗凝管抽取外周血2ml；2.将装有2ml分离液的试管微微倾斜，用吸管将抽取的抗凝外周血缓缓加入到分离液上层，保持液面分层清晰；3.水平离心机中离心，2000rpm，20min；4.将离心好的试管轻轻拿出，用毛细吸管吸取PBMC层细胞涂片；5.将涂片进行瑞氏染色。第8页/共8页感谢您的欣赏材料1．肝素溶液 用生理盐水将肝素配成125～250 U/ml的溶液，置4 ℃下保存备用。2．淋巴细胞分层液 市售或自配，20 ℃时密度应为(1.077±0.001) g/L。3．Hanks平衡盐溶液（HBSS）或磷酸盐缓冲液（PBS）pH 7.2～7.4。4．完全RPMI-1640培养液。5．15 ml或50 ml锥底离心管。6．水平离心机，显微镜。7．玻璃吸管，滴管，细胞计数板等。8．2％台盼蓝染液。
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