实验三细菌革兰氏染色.ppt

第一页，共十六页，2022年，8月28日 目的要求 a. 掌握细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤和关键点 b. 掌握革兰氏染色法的步骤和关键点 c. 识别细菌的革兰氏染色结果并画图 d. 学习无菌操作技术 第二页，共十六页，2022年，8月28日 材料用具 显微镜，擦镜纸，纱布 革兰氏染液 香柏油,自来水,95%酒精; 载玻片,插镜纸,接种环,镊子,酒精灯; 金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,未知菌12小时的液体培养液 大肠杆菌和酵母菌平板 第三页，共十六页，2022年，8月28日 实验步骤 1.涂片 左手持菌液试管,右手持接种环在火焰中灼烧,冷却后从试管中去菌液一滴,在洁净载玻片上做一涂膜; 从固体斜面或平板上取菌时,用无菌接种环取少量菌体,涂抹均匀于玻片上预先滴有的一滴自来水中; 第四页，共十六页，2022年，8月28日 实验步骤 2.干燥 在空气中自然干燥或在火焰快速通过干燥(与热固定同步进行). 3.热固定 用镊子夹住涂片一端,在火焰上连续通过几次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜. 第五页，共十六页，2022年，8月28日 实验步骤 4.染色 在固定的标本上加结晶紫染液1-2滴,染色1min,轻轻滴加水洗; 吸干, 加半滴水, 盖上盖玻片, 滴上半滴镜油油镜检。(到此实际上即为细菌普通染色) 揭去盖玻片,吸干水, 滴加1-2滴革氏碘液媒染1min, 轻轻水洗,吸干。 第六页，共十六页，2022年，8月28日 实验步骤 滴加95%乙醇溶液(或30%丙酮乙醇脱色),轻轻摇动玻片至液滴无色,不要过分脱色(约30秒),立即轻轻滴加水洗;吸干。 滴加蕃红染液复染3min,轻轻滴加水洗; 吸干载玻片背面及标本周围水渍,滴上半滴水，盖上盖玻片,油镜镜检; 第七页，共十六页，2022年，8月28日 实验步骤 5.镜检 注意标本中细菌的形态,大小,排列,和颜色. 革兰氏阳性菌为紫色; 革兰氏阴性菌为红色; 第八页，共十六页，2022年，8月28日 金黄色葡萄球菌(24hrs)染色结果 第九页，共十六页，2022年，8月28日 金黄色葡萄球菌(48hrs)染色结果 第十页，共十六页，2022年，8月28日 金黄色葡萄球菌(72hrs)染色结果 第十一页，共十六页，2022年，8月28日 大肠杆菌(24hrs)染色结果 第十二页，共十六页，2022年，8月28日