实验三食品中微生物菌落总数的测定.ppt

实验三食品中微生物菌落总数的测定 第一页，共十四页，2022年，8月28日 一、实验目的 学习并掌握标准平皿活菌计数（SPC）的基本原理和方法 明确菌落总数测定对被检样品进行卫生学评价的意义 第二页，共十四页，2022年，8月28日 二、实验原理 菌落总数：食品检样经过处理，在一定条件下（如培基基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。 第三页，共十四页，2022年，8月28日 标准平皿活菌计数法（SPC法）是最常用的活菌计数法 将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散的细胞通过混菌法或涂布法使其均匀分布在平皿培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来。 反映食品被细菌污染的程度 由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验条件下不生长，故计数结果要比实际值低。 第四页，共十四页，2022年，8月28日 三、实验器材 （一）培养基 平板计数琼脂培养基 （二）实验材料 市售饮料 （三）其他 1、无菌培养皿7套 2、无菌吸管（ 1支10mL， 5支1mL） 3、无菌生理盐水（225mL三角瓶1个，9mL试管5支） （四）仪器 超净工作台 第五页，共十四页，2022年，8月28日 四、实验步骤 1、样品处理： 以无菌操作，先用酒精棉球擦拭样品表面后，用无菌剪刀将包装剪破，量取检样25mL放入225mL灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成10-1稀释度样品 2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4 第六页，共十四页，2022年，8月28日 菌落总数操作流程图 第七页，共十四页，2022年，8月28日 3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液，用无菌移液管分别吸取1mL到无菌平皿中，每个稀释度做2个平皿；同时，吸取1mL无菌生理盐水到1个平皿中作为空白对照 4、熔化培养基 5、及时将已冷却到46℃的培养基倾入到平皿中，并转动平皿使其混合均匀 6、37℃倒置培养2天 7、按照计数原则计数 第八页，共十四页，2022年，8月28日 五、菌落计数方法 有较大片状菌落生长者不宜采用，若片状小于平板一半时且余部均匀分布，则以半个平板菌落数2倍报告 无明显界限链状菌落每条单链视为一个菌落 选取菌落数在30~300cfu之间，无蔓延生长的平板计数 低于30的记录具体菌落数，大于300的可记录为多不可计，每个稀释度采用2个平行的均数 第九页，共十四页，2022年，8月28日 1、计数结果的表述 若只有一个稀释度平板在30~300CFU，则计算两平行平板的均数，再乘以稀释倍数报告之 若有连续两个稀释度符合计数要求则按下公式： 例：10-2=232，244 10-3=33，35 菌落总数 所有符合计数要求的平板菌落数之和 较低稀释度有效平板数 较高稀释度有效平板数 较低稀释度 N= (232+244+33+35) (2+2×0.1)×10-2 = 24727 第十页，共十四页，2022年，8月28日