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实验八中性粒细胞吞噬功能检测 第1页/共14页 实验七思考题：为何常用密度为1.077土0.002 的分层液分离人单个核细胞？ 答：这和人外周血中各类成分密度有关。 血小板： 1.030-1.035，淋巴细胞： 1.075-1.090，粒细胞 : 1.092，红细胞： 1.093，因此将血液叠加在1.077土0.002的分层液上面，经离心会单个核细胞会处于血浆和分离液中间，从而达到分离目的。 第2页/共14页 实验八 中性粒细胞吞噬功能检测 临床微生物及免疫学检验教研室 第3页/共14页 一、实验目的 掌握中性粒细胞吞噬功能试验的原理。 熟悉中性粒细胞吞噬功能试验的操作方法。 第4页/共14页 二、实验原理 中性粒细胞具有吞噬细菌和异物颗粒的能力。 在体外将中性粒细胞与细菌或异物颗粒共同孵育后，即可被中性粒细胞吞噬、摄入，显微镜观察可见中性粒细胞内有细菌或异物颗粒。 第5页/共14页 二、实验原理 计算吞噬有细菌或异物颗粒的中性粒细胞数占中性粒细胞总数的百分率和每个中性粒细胞平均吞噬细菌或异物颗粒数，可反应中性粒细胞的吞噬功能。 第6页/共14页 三、实验器材 标本：人抗凝血 被吞噬物 ： 金黄色葡萄球菌 培养基：肉汤培养基 试剂：瑞－吉氏染液、无菌生理盐水 器材：枸橼酸钠抗凝管、试管、载玻片、 恒温箱、显微镜等。 第7页/共14页 制备被吞噬物：金葡菌接种于肉汤培养基中培养12h后，置4℃备用。 2. 准备被检测标本：枸橼酸钠抗凝血1ml。 四、实验步骤 第8页/共14页 实验步骤 混合培养：在1ml抗凝血中加入金葡菌悬液3-5滴，混匀，置37 ℃水浴箱中，孵育30min，期间每10min摇匀1次。 制备细胞推片，瑞-吉染色： 油镜观察：计数200个中性粒细胞，记录吞噬细菌的细胞数和每个中性粒细胞吞入的细菌数。 第9页/共14页 五、结果判断 中性粒细胞核深染且分叶，胞浆淡红色，细菌呈紫色 - 第10页/共14页 吞噬百分率（%）= ×100％ 吞噬指数= 参考区间：吞噬率（91 + 5.8）%；吞噬指数大于1 计数的中性粒细胞吞噬细菌总数 计数的中性粒细胞总数 吞噬细菌的中性粒细胞数 计数的中性粒细胞总数 - 第11页/共14页 六、注意事项 1.抗凝剂的选择：肝素抗凝时白细胞着色不佳，经瑞-吉染色后易出现深蓝色背景；EDTA影响 白细胞的吞噬功能；构椽酸钠抗凝最合适。 2.细菌的浓度和孵育温度： 3.血涂片的质量： 第12页/共14页 七、应用与评价 本试验可用于检测有吞噬功能障碍的病症，如结合NBT（硝基蓝四氮唑还原试验），在一定程度上可反映机体的免疫功能状态，也可用于有免疫调节活性药物的筛选。 此法操作简便，不需特殊设备，省时，费用低廉。但光学显微镜分辨率低，有时难以计数吞入的细菌颗粒。 第13页/共14页 感谢您的欣赏 第14页/共14页