基因工程授课.pptxVIP

基因工程授课;;第3页/共74页;;一、DNA重组技术的基本工具;1、限制酶 识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。;　;限制酶切割的是什么？;第9页/共74页;第10页/共74页;第11页/共74页;1、下列关于限制酶的说法正确的是（ ） A、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少 B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C、不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端 D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键;2.右图为DNA分子结构示意图，对该图的正确描述是 A．④的名称是胞嘧啶脱氧核苷酸 B．解旋酶作用的部位是⑨ C．某限制性核酸内切酶可选择⑨处作为切点 D．DNA连接酶可连接⑩处断裂的化学键;第14页/共74页;;; 种类 项目　　;第18页/共74页;第19页/共74页;第20页/共74页;基因工程的基本操作程序;;（一）从基因文库中获取目的基因;;第25页/共74页;;;;基因组文库和部分基因文库的比较;基因组文库和部分基因文库的比较;（二）利用PCR技术扩增目的基因;PCR技术;逆转录法;总结、目的基因主要是指_______________的结构基因。获得目的基因的常见方法有三种：（1）从基因文库中获取目的基因，根据基因的_________序列，基因在________上的位置，基因的________产物mRNA，基因的_______产物蛋白质等获取目的基因。（2）利用PCR技术扩增目的基因，该技术是一项在________完成的核酸合成技术，前提条件是有一段已知目的基因的________序列，以便于合成_________。（3）如果基因较小且核苷酸序列已知，可以通过____________方法。 ;下列获取目的基因的方法中需要模板链的是 ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③反转录法 ④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③;基因表达载体的作用：;不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。必须构建上述元件的主要理由是： （1） 生物之间进行基因交流，只有使用受体生物自身基因的启动子才能比较有利于基因的表达； （2） 通过cDNA文库获得的目的基因没有启动子，只将编码序列导入受体生物中无法转录； （3） 目的基因是否导入受体生物中需要有筛选标记； （4） 为了增强目的基因的表达水平，往往还要增加一些其他调控元件，如增强子等； （5） 有时需要确定目的基因表达的产物存在于细胞的什么部位，往往要加上可以标识存在部位的基因（或做成目的基因与标识基因的融合基因），如绿色荧光蛋白基因等。;;表达载体; 用一定的_________切割 质粒，使其出现一个切 口，露出____________。 用_____________切断目 的基因，使其产生_____ ____________。;注意：载体与表达载体的区别 二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构;;农杆菌转化法 ;基因枪法：目的基因导入单子叶植物细胞;;;;;;DNA分子杂交技术;;;;;;（2）抗病转基因植物 抗病转基因植物所用的基因： ①常用：病毒外壳蛋白基因和病毒的复制酶基因 ②抗真菌转基因植物中有：几丁质酶基因和抗毒素合成基因 （3）其它抗逆转基因植物 ①抗盐碱、干旱的基因：调节细胞渗透压的基因 ②抗冻蛋白基因 ③抗除草剂基因 ;2、改良农作物的品质;;（二）用于改善畜产品的品质;将药物蛋白基因与乳腺蛋白基因的启动子等调控组件重组在一起，通过显微注射等方法，导入哺乳动物的受精卵中，将受精卵送入母体，使其发育成转基因动物。转基因动物进入泌乳期后，可以通过分泌乳汁生产所需要的药品，称为乳腺生物反应器或乳房生物反应器。;①获取目的基因（例如血清白蛋白基因） ②构建基因表达载体（在血清白蛋白基因前加特异表达的启动子） ③显微注射导入哺乳动物受精卵中 ④形成胚胎 ⑤将胚胎移植入母体动物 ⑥发育成转基因动物（只有在产下的雌性个体的乳腺细胞中，转入的基因才能特异表达）。;（四）用转基因动物作器官移植的供体;;;DNA分子杂交是基因诊断最基本的方法之一。当用一段已知基因的核苷酸序列作为探针，与被测基因进行接触，若两者的碱基完全配对成双链，则表明被测基因中含有已知的基因序列。;;;蛋白质工程的概念;比较项目;1、下列关于基因表达载体的叙述不正确的是 A．启动子是与RNA聚合酶识别和结合的部位，是起始密码子 B．启动子和终止子都是特殊结构的DNA短片段，对mRNA的转录起调控作用 C．标记基因是为了鉴