荧光定量实验数据分析.ppt

荧光定量实验数据分析;内 容;AB荧光定量PCR仪的发展历史;AB荧光定量PCR仪家族;荧光定量PCR实验数据分析;荧光PCR实验结果的分析流程;基线与阈值线的设置;基线的设定;阈值线的设定;实验结果的考评指标;绝对定量实验效果的评估; CT = k lg X0 + b;荧光定量PCR实验常见问题;病原体核酸检测效果的主要影响因素;实验污染 反应试剂质量问题 未正确密封而导致的试剂蒸发 错误的荧光染料设置 错误的反应程序设置 使用错误的耗材 荧光污染 仪器硬件问题 ;两种容易混淆的阴性对照;故障排除时提供有用信息的软件界面;原始荧光组分曲线-v2.0;扩增曲线-v2.0;标准曲线-v2.0;原始多通道荧光信号-v2.0;原始多通道荧光信号-v2.0;质控报告-V2.0;理想的实验结果;案例1:是否存在扩增？;这些曲线都有典型的指数增长期，而且和其他的曲线平行（虽然比较短）。;同时也具有特征性的三个增长阶段。 ;可能是目标模板的浓度太低。 通常如果模板的起始浓度太低, 反应体系会形成大量的引物二聚体。 大量引物二聚体的形成使得引物很快消耗完，从而造成扩增曲线的平台期很低。;案例2:是否存在扩增？;如何判断它们是否存在扩增？;同时，这些曲线都没有明显的指数增长期。 ;其次，看Y轴的数值。 这些“可疑”曲线的指数增长期范围常常是落在1e-2 的范围内。 ;最后，查阅线性图： 曲线一直没有指数上升的趋势，提示不存在扩增。 轻微的荧光增长可能来源于探针的降解。 ;案例3:是否存在扩增？;切换到线性图，可以看到曲线有一定的上升。;分析;总结：遵循扩增曲线形态第一，Ct值第二的判读原则。;咨询联络方式;Thanks for your attention 荧光定量实验数据分析;内 容;AB荧光定量PCR仪的发展历史;AB荧光定量PCR仪家族;荧光定量PCR实验数据分析;荧光PCR实验结果的分析流程;基线与阈值线的设置;基线的设定;阈值线的设定;实验结果的考评指标;绝对定量实验效果的评估; CT = k lg X0 + b;荧光定量PCR实验常见问题;病原体核酸检测效果的主要影响因素;实验污染 反应试剂质量问题 未正确密封而导致的试剂蒸发 错误的荧光染料设置 错误的反应程序设置 使用错误的耗材 荧光污染 仪器硬件问题 ;两种容易混淆的阴性对照;故障排除时提供有用信息的软件界面;原始荧光组分曲线-v2.0;扩增曲线-v2.0;标准曲线-v2.0;原始多通道荧光信号-v2.0;原始多通道荧光信号-v2.0;质控报告-V2.0;理想的实验结果;案例1:是否存在扩增？;这些曲线都有典型的指数增长期，而且和其他的曲线平行（虽然比较短）。;同时也具有特征性的三个增长阶段。 ;可能是目标模板的浓度太低。 通常如果模板的起始浓度太低, 反应体系会形成大量的引物二聚体。 大量引物二聚体的形成使得引物很快消耗完，从而造成扩增曲线的平台期很低。;案例2:是否存在扩增？;如何判断它们是否存在扩增？;同时，这些曲线都没有明显的指数增长期。 ;其次，看Y轴的数值。 这些“可疑”曲线的指数增长期范围常常是落在1e-2 的范围内。 ;最后，查阅线性图： 曲线一直没有指数上升的趋势，提示不存在扩增。 轻微的荧光增长可能来源于探针的降解。 ;案例3:是否存在扩增？;切换到线性图，可以看到曲线有一定的上升。;分析;总结：遵循扩增曲线形态第一，Ct值第二的判读原则。;咨询联络方式;Thanks for your attention