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超氧化物歧化酶在红豆越橘酵素发酵工艺中的优化 红色越兰是蔷薇科植物科的一种浆果，也被称为红果和红豆。 酵素是以蔬菜、水果、菌类等为原料，经过微生物发酵而制成的，富含多种维生素、矿物质、生物酶等生物活性物质的食品 1 仪器和试剂盒 1.1 lmoe-lra-c L a m b d a 3 6 5紫外可见分光光度计（美国Perkin Elmer);DHP-9272恒温培养箱，电热恒温水浴锅（上海一恒）；LDZM-80KCS立式压力蒸汽灭菌器（上海申安）；电子分析天平（赛多利斯）；LG10-2.4A高速离心机（北京京立）；超净工作台（苏州净化设备有限公司）。 1.2 植物属virusviti 红豆越橘采收自黑龙江省伊春市，经黑龙江省中医药科学院王伟明研究员鉴定为杜鹃花科越橘属植物（Vaccinium vitis-idaea L.）的果实；DPPH（上海阿拉丁）；SOD测试盒（南京建成生物工程研究所）；维生素C(V 2 方法 2.1 红豆越橘的制备 挑选成熟、无霉变的红豆越橘果实，除去树叶、杂质，用无菌水洗去泥沙，匀浆，分别称取50 g红豆越橘置于无菌密封罐中，按比例加入无菌水及白砂糖，恒温下发酵，每隔2 d放气一次，发酵终止后过滤，于紫外灯下照射2 h终止发酵。 2.2 单因素试验 2.2.1 发酵温度的确定 称取红豆越橘50 g，白砂糖10 g，料液比1:2，按红豆越橘酵素的制备方法，分别在15,20,25,30,35℃恒温发酵20 d，发酵终止后，测定其SOD酶活力，每个样品重复3次。 2.2.2 料液比的确定 称取红豆越橘5 0 g，白砂糖10 g,25℃恒温，分别按料液比2:1,1:1,1:2,1:3,1:4加入无菌水，按红豆越橘酵素的制备方法，发酵20 d，发酵终止后，测定其SOD酶活力，每个样品重复3次。 2.2.3 白砂糖的添加量 称取红豆越橘50 g,25℃恒温，料液比1:2，按红豆越橘酵素的制备方法，分别加入6,8,10,12,14 g白砂糖，发酵20 d，发酵终止后，测定其SOD酶活力，每个样品重复3次。 2.2.4 发酵温度的确定 称取红豆越橘50 g，白砂糖10 g，料液比1:2,25℃恒温，按红豆越橘酵素的制备方法，分别发酵10,15,20,25,30 d，发酵终止后，测定其SOD酶活力，每个样品重复3次。 2.3 正交试验 通过单因素试验，确定以发酵温度、料液比、白砂糖用量及发酵时间为考察因素（见表1），选用L 2.4 dpph自由基容量的测定 2.4.3 红豆越橘酵素稀释液的制备 精密吸取红豆越橘酵素原液200μl，用蒸馏水定容至10 ml，即得红豆越橘酵素稀释液。再分别吸取400,500,600,700,800μl稀释液，定容至10 ml，即得红豆越橘酵素样品溶液。 2.4.4 红豆越橘酵素v清除率的测定 在试管中加入0.15 mmol/L的DPPH工作液3.2 ml，再加入红豆越橘酵素样品溶液0.8 ml，混匀后，25℃避光反应30 min,517 nm波长处测定吸光度，以V 清除率（%）=（A 式中A 2.5 红葡萄糖酶sod活性的测定 将红豆越橘酵素液4000 r/min离心10 min，吸取上清，按SOD酶试剂盒说明书测定SOD酶活力。 2.6 数据分析 采用SPSS 17.0统计软件分析处理相关数据。 3 结果 3.1 单因素试验的结果 3.1.1 发酵温度对红豆越橘酵素sod酶活力的影响 结果见图1。由图1可见，在15～30℃之间，红豆越橘酵素的SOD酶活力随温度的升高显著增长，温度达35℃时，呈骤然下降趋势，分析可能是温度过高影响酶的活性。 3.1.2 料液比对sod酶活力的影响 结果见图2。由图2可见，随料液比增加，S O D酶活力值呈上升趋势，当料液比达1:2时，SOD酶活力达最高值，之后呈缓慢下降趋势，分析可能是达最佳料液比后，随料液比增加，酵素浓度下降。 3.1.3 红豆越橘酵素sod酶活力变化 结果见图3。由图3可见，随白砂糖用量的增加，红豆越橘酵素的SOD酶活力呈显著上升趋势，当白砂糖用量达10 g时，SOD酶活力值最高，随后呈缓慢下降趋势。 3.1.4 发酵时间对赤豆酶sod酶活力的影响 结果见图4。由图4可见，随发酵时间的增加，红豆越橘酵素SOD酶活力值显著增加，发酵时间在25～30 d时，SOD酶活力基本趋于平稳。 3.2 经验单因素试验结果 正交试验及方差分析结果见表3、表4。由表3、表4可见，4个因素对红豆越橘酵素影响次序为C（白砂糖用量）A（发酵温度）D（发酵时间）B（料液比），其中白砂糖用量对试验结果有显著影响（P0.05），发酵温度、料液比、发酵时间对实验结果无显著影响。根据直观分析结果，确定最佳工艺条件为A 3.3 dpph自由基容量测定结果 红豆越橘酵素