GA 656-2006人血液（痕）ABO血型检测凝集法、解离法.pdf

ICS 13. 310GAA 92中华人民共和国公共安全行业标准GA 656—2006人血液（痕)ABO血型检测凝集法、解离法Detection method for ABO blood type in human blood(stains)-Hemagglutination test,elution test2006-11-03 发布2007-03-01实施中华人民共和国公安部发布码防 GA 656—2006前言本标准的 4. 1a)为强制性的,其余为推荐性的。本标准的附录 A、附录 B为规范性附录。本标准由全国刑事技术标准化委员会提出并归口。本标准起草单位：公安部物证鉴定中心、黑龙江省公安厅等。本标准起草人：温佩忠、张大安、刘开会、李晓平、朱爱民、李澎、刘旭丹、常彩琴、张英兰、李兆隆等。 GA 656--2006人血液（痕）ABO血型检测凝集法、解离法1范围本标准规定了法医生物物证检验中血液（痕)ABO血型检测的材料准备、操作方法和结果判定。本标准适用于从事法庭科学检验人血液（痕)ABO血型。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GA 4712004抗 A、抗B血清试剂3原理凝集法：人红细胞表面存在有A、B和H抗原物质，在抗A抗体、抗B抗体或抗H抗体的作用下，发生抗原抗体反应，使红细胞发生凝集。根据与相应抗体发生凝集反应的情况，可判断 ABO血型。条件下抗原抗体复合物可以释放抗体，而保持抗原和抗体原有的性质不变的原理来设计的。检材中的A、B血型物质，在抗A抗体或抗B抗体存在的情况下，发生抗原抗体反应，形成抗原抗体复合物。当在50℃～56℃条件下，抗原抗体复合物发生解离，使抗体游离于液体中，当温度降低至37℃左右时，游离的抗体与相应的指示红细胞抗原发生凝集反应，在显微镜下可观察到凝集发生。根据与相应指示红细胞发生凝集反应的情况,可推断血痕所携带的抗原,判断 ABO 血型。4试剂与器材4.1 试剂a）标准抗A抗体、标准抗B抗体试剂。符合GA 471-2004的各项要求；b)甲醇(分析纯);c）生理盐水；d)A型、B型指示红细胞悬液(0.1%～0.2%)(见附录 A);e）鸡蛋清溶液(3%)（见附录 B)。4.2器材a)台式离心机；b)光学显微镜；c)负压吸引装置;d)恒温箱；e)加样器、加样器吸头；f)眼科剪、眼科镊、分离针；载玻片、盖玻片、载玻片架、洗片架、保湿盒、白瓷盘、毛细管；h)玻璃笔、滤纸。 GA作方法5. 1 凝集法检测人血液 ABO 血型5.1.1 取待检血液少许,用生理盐水离心洗涤(1 000 r/min,3 min.)1 次～3 次，并用生理盐水配成3%~5%的红细胞悬液。5.1.2取洁净凹玻板，两凹处分别标记A与B。两凹内分别滴加标准抗A、标准抗B抗体试剂各1滴。5.1.3于两凹内分别滴加5.1.1中配制的 3%～5%的红细胞悬液 1滴,摇动凹玻板,摇匀抗体和细胞，室温观察凝集情况，5 min～10 min后记录结果。5. 2 蛋白粘片法检测人血痕 ABO 血型5.2.1 取洁净载玻片,用玻璃笔在两端各画一直径 0.6 cm～0.8 cm圆圈。分别用记号笔注明A、B端及检材标号。置于载玻片架上。5.2.2用吸管吸取3%蛋清溶液少许，分别点铺于载玻片A、B端的圆圈内，并吸去多余的蛋清液体。5.2.3以洁净剪刀、镊子取血痕纱布的一根带血痕纱线约0.1 cm长（或相应大小的其他类检材，或刮5.2.4待蛋清自然干燥后，各滴加甲醇溶液一滴固定，自然挥发干燥。5.2.5按标记在A、B两端圆圈内分别滴加抗 A、抗 B血清试剂覆盖检材，然后将其连同载玻片架放置于保湿盒内，室温负压(760 mmHg)吸收20 min。如果没有负压吸引器，置 4℃～8℃冰箱中吸收约2小时。5.2.6取出载玻片垂直放在洗片架上，垂直浸人盛有冷自来水的白瓷盘内，不经晃动立即垂直取出换水,如此反复8次～12 次。5.2.7用滤纸平铺于载玻片上吸干水分，按标记分别在两端滴加相应的0.1%～0.2%指示红细胞，加盖盖玻片，放人56℃恒温箱内热解离5min～10min。5.2.8取出载玻片，置保湿盒内室温放置10 min～20min后，放于显微镜下，以分离针尖轻点盖玻片，观察红细胞凝集情况，记录结果。结果判定6凝集法结果判定见表1,蛋白粘片法结果判定见表2。表 1 凝集法检测人血液 ABO 血型结果判定检材编号A侧B 侧结果判定01一2+A3-+AB4+表 2 蛋白粘片法检测人血痕 ABO 血型结