DB37T 344-2003花生中黄曲霉毒素残留量的检验方法－高效液相色谱法.pdf

ICS65.020B33DB37山东省地電方标准DB37/T 3442003花生中黄曲霉毒素残留量的检验方法一高效液相色谱法Determination of aflatoxins in peanut by HPLC2003-01-24发布2003-02-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 344—2003前言附录A为本标准的资料性附录。本标准由中华人民共和国山东出入境检验检疫局提出并归口，本标准由中华人民共和国青岛出入境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：张鹏、刘钢。 DB37/T 344—2003花生中黄曲霉毒素残留量的检验方法一高效液相色谱法1范围本标准规定了花生中黄曲毒毒素（B、B、G、G）残留量的高效液相色谱检验方法，本标准适用于进出口花生及其制品中黄曲毒毒系（Bi、B2、G、G）残留量的检验。2测定方法试样中的黄曲霉毒素用甲醇-水（28+23）提取，提取液经过滤后，进液相色谱分离，经柱后衍生后，荧光检测器外标法测定.2. 1试剂和材料除另有规定外，月所有试剂均为分析纯，水为蒸镐水，2.1.1甲醇：2. 1. 2甲醇：液相色谱纯：2. 1. 3乙睛：液相色谱纯：2. 1. 4克雷兹试剂I（CARREZI）：0.25mo1/L亚铁鼠化钾落液：2. 1. 5克雷兹试剂II（CARREZI）：0.25Ⅱo1/L醋酸锋落液：2. 1. 6硝酸：65%；2. 1. 7溴化钾：μ L) :2. 1.9黄曲霉毒素标准储备液：SUPELCO产品或相当者：2.1.10黄曲霉毒素标准工作液：移取1.0mlL黄曲毒毒素标准储备液（3.2.9），以流动相（3.2.8）定容至100ml;2.1.11提取液：甲醇+水（28+23，V/V）2.2仪器和设备2.2.1高效液相色谱仪配荧光检测器：2.2.2色谱柱：C,125mX4mm×5μl;2.2.3高速均质器：2.2.4均质杯：1500mL。2.3试样制备将所取样品，用四分法缩分出约200g：用切碎机或粉碎机将缩分出的样品全部切碎或粉碎成尺寸不大于1m并通过2.0mm围孔筛碎粒，称取该试样200g于均质瓶中，依次加入500mL提取液、2.5ml克雷慈试剂I和2.5m克雷慈试剂Ⅱ，于均质器上高速提取3min。稍置，取上清液过滤，取约2mL滤液供HPLC测定。2.4测定步骤2.4.1色谱条件2.4.1.1流速：0.6 ml./min2. 4. 1. 2检测器波长：激发波长：365nm，发射波长：435nm:2. 4. 1. 3衍生器工作条件（KOBRACELL）：100μA.1 DB37/T 344—20032.4.2测定使用液相进样器，分别取1.0μL、2.0μL.5.0μL、10.0μL、25.0μL标准工作液（3.2.10)进行测定，用峰面积分别计算Bi、B、G和G的校正曲线。取过滤后的样液（3.4）25.0L进行测定。2.5结果的计算与表述使用工作站或按下式计算样品中黄曲霉毒素含量：检测结果按公式（2）计算：X=hr·c- VIft. - m式中：X一试样中黄曲霉毒素（BJ、Bz、G,或G）含量，μg/kghtr—样液中黄曲霉毒素（Bi、B、Gi或G:）峰高或峰面积，m或mmh一混合标准工作液中黄曲霉毒素（B、Bz、G或Gz）峰高或峰面积，mm或mnHPLC测定样液中黄曲霉毒素（BI、B:、G;或G,）浓度，μg/LV一样液最终定容体积，mLm—最终样液所代表的试样量，计算结果需扣除空白值。3检测低限与回收率3. 1测定低限：本方法的测定低限为黄曲霉毒素Bi：1.0μg/kg：Be:0.3μg/kg：G：1.0μg/kg：Ge：0.3μg/kg3. 2回收率花生空白样品中的回收率为：黄曲霉毒素添加量回收率(%)1 μ g/kg129. 8B;2 μ g/kg93. 05 μ g/kg8°781 μ g/kg127. 7Bs2 μ g/kg96. 95 μ g/kg86. 61 μ g/kg126. 3Gi2 μ g/kg98. 15 μ g/kg80. 51 μ g/kg121. 6G:2 μ g/kg93. 25 μ g/kg86. 52 DB37/T 344—2003附录A（资料性附录）黄曲霉毒素标准品色谱图Noym.2018161412108-