DB37_T 1019-2008大豆及其制品中抗草甘膦转基因成分的实时荧光定量PCR检测方法.pdf

ICS 67. 050X 04DB37山东省地方标准DB37/T 1019—2008大豆及其制品中抗草甘膦转基因成分的实时荧光定量PCR检测方法Quantitative Detection for Giyphosate-resistant Genetically ModifiedIngredient Soybean Products by Real Time Fluorescence PCR Method2008-08-12发布2008-09-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T言本标准由山东省质量技术监督局提出。本标准由山东食品标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省农业管理干部学院、山东省标准化研究院、暨南大学。本标准主要起草人：白卫滨、孙建霞、刘冠军、黄亚东、姜桂传、于克学。- DB37/T1019—2008大豆及其制品中抗草甘麟转基因成分的实时荧光定量PCR检测方法1范围本标准规定了大豆制品中转基因成分的实时荧光定量PCR检测方法。本标准适用于转基因大豆RoundupReady及其衍生品种，以及制品中抗草甘麟转基因成分的定量PCR检测。本标准的定量检测限为0.1%。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的多改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的必威体育精装版版本。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本适用于本标准。GB/T 19495. 12004转基因产品检测通用要求和定义GB/T 19495. 22004转基因产品检测实验室技术要求GB/T 19495. 32004转基因产品检测核酸提取纯化方法GB/T 19495. 72004转基因产品检测抽样和制样方法3术语、定义和缩略语本标准采用下列术语、定义和缩略语。更多的定义、术语和缩略语，可参见GB/T19495.1-2004《转基因产品检测通用要求和定义》。3.1术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3. 1. 1内源基因 endogenous reference gene在转基因作物基因组中拷贝数恒定的、不显示等位基因变化的、在其他品种作物中不存在的基因该基因即可用于评价样品中是否存在该作物品种，也可作为参照基因序列对某一目的基因进行定量检测，同时还可确定DNA提取是否成功、并验证灾光PCR反应体系中是否存在抑制物质，3. 1. 2外源基因exogenous gene利用生物工程技术转入其它生物基因，使该生物品种表现新的生物学特性。3. 1. 3标准品standard substance由认可机构制备、有溯源性的并经检测证实含有不同浓度目标序列的物质。3.2缩略语下列缩略语透用于本标准。3. 2. 1Lectin植物凝集素，为大豆本身含有的内源基因。1 DB37/T1019—20083. 2. 2CaMV35S35Spromoterfrom cauliflowermosaicvirus,来自于花椰菜花叶病毒的35S启动子，3. 2. 3EPSPS5-enolpyruvy1shikimate-3phosphatesynthasegene,5-草酸3磷酸合成酶基因3. 2. 435S/EPSPS花椰菜花叶病毒的35S启动子和5-荞草酸-3-磷酸合成酵基因的结构基因。3. 2. 510C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的灾光信号到达设定的阔值时所经历的循环数。3. 2. 6PCRPolymerase chain reaction，即聚合酶链式反应：以耐热DNA聚合酶和一对引物（与待测的目标核酸分子序列同源的DNA片段）通过高温（DNA分子变性）和低温（引物和目标核酸分子复性并被耐热DNA聚合酵延伸）的交替循环扩增待测的目标核酸分子的方法，3. 2. 7实时荧光定量PCR灾光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入灾光基团，利用灾光信号积系实时监控整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模版进行定量分析的方法。4防污染措施大豆制品中转基固成分的实时荧光定量PCR检测过程中的防污染措施按GB/T19495.2-2004的规定的方法执行，5抽样、制样和DNA模板制备5.1抽样和制样按GB/T19495.7-2004规定的方法.5.2DNA模板制备按GB/T19495.3-2004规定的方法，6实验方法6. 1原理定量一般是相对含量，是指两个所检测目标核酸绝对含量（ng数或拷贝数）的比值（通常采用百分比），例如检测的外源基因序列的绝对含量（ng数或拷贝数）与内源基因序列的绝对含量（ng数或拷贝数）的比值。实时荧光PCR定量检测是在PCR反应体系中，除采用特异的引物外，还增加了与模版DNA