CJ 3018.14-1993生活垃圾渗沥水 细菌总数的检测 平板菌落计数法.pdf

中华人民共和国城镇建设行业标准生活垃圾渗沥水细菌总数的检测CJ/T 3018. 14—1993平板菌落计数法Leachate-Detection of total bacterial numberplate count for bacterial colonies主题内容与适用范围本标准规定了用平板菌落计数法测定渗沥水的细菌总数。本标准适用于从生活垃圾中渗出来的液体。2 引用标准GB 5750生活饮用水标准检验法细菌总数GB 4789.2食品卫生微生物学检验菌数总数测定3术语细菌总数是指1mL渗沥水试样在一定条件下培养后所生长的细菌菌落的总数。4　原理每种细菌都有其定的生理特性，应用不同的营养物质及其他生理条件（如温度、培养时间、pH、需氧性质等)去满足它,才能分别地将各种细菌培养出来。在实际工作中，一般都只用一种方法(即在营养琼脂培养基中，于37℃经24 h培养)进行细菌总数的测定，因此，所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧及兼性厌氧的细菌菌落总数。5 培养基和试剂馏水或去离子水。5. 1 无水乙醇(C,H,OH)。5.2氢氧化钠(NaOH）,15%(m/m)溶液将 15 g氢氧化钠(NaOH),溶于100 mL水中。5.3营养琼脂5.3.1成份：蛋白陈10g牛肉膏3g氯化钠5g琼脂10~~20 g蒸馏水1 000 mL5.3.2制法中华人民共和国建设部1993-05-03批准1993-09-01实施290 CJ/T 3018. 14—1993将上述成份混合后，加热溶解，滴加氢氧化钠溶液(5.2)调整pH为7.4～7.6,用漏斗分装约15mL于玻璃试管(6.8),在121℃高压灭菌20min。冷却后贮存在冷暗于燥处备用。5.4生理盐水将(8.50～9.50)g氯化钠(NaCI)溶于水中,稀释成1 000 mL,摇匀。pH值应为4.5~～~7.0。6仪器、设备6.1 高压蒸汽灭菌器。6.2干燥箱：最高工作温度300℃。6.3＇恒温培养箱：（36±1)℃。6.4 冰箱。6.5恒温水浴：（46±1)℃。6.6放大镜。6.7稀释瓶:125 mL小口玻璃方瓶。6.8玻璃试管：(18×180)mm,乎口。6.9平Ⅲ：直径 90 mm。6.10刻度吸管:1 mL,10 mL,分度至0.1 mL。6.11 酒精灯。7样品供细菌总数检测的渗沥水实验室样品量约需100mL，用经灭菌处理过的玻璃瓶采集。采样后应尽快检测,在2 h内不能处理时,应置于温度为2～5℃处，最长保存时间为 6 h。8步骤8.1准备工作8.1.1工作室及操作台经清扫后，用紫外线灭菌10 min。8.1.2玻璃器Ⅲ置于干燥箱中于160℃灭菌2h。8.1.3将装有 90 mL 生理盐水的稀释瓶和 9 mL生理盐水的试管，前者瓶口橡皮塞衬上滤纸条，后者管口塞上棉花球，置高压蒸汽灭菌器（6.1)内，于121℃灭菌20min，冷却待用。8.1.4将营养琼脂培养基（5.3.2)置于沸水锅内，融化后随即转人（46士1)℃恒温水浴，保温待用。8.2试样稀释8.2.1以无菌操作，吸取经充分混匀的试样10mL于盛有90mL灭菌生理盐水的稀释瓶（8.1.3)中，充分混匀后就成1：10的稀释液。8.2.2吸取1：10稀释液1mL，沿管壁徐徐注人盛有9mL灭菌生理盐水的试管(8.1.3)中，混勾而成1：100的稀释液。8.2.3按上述操作进行10倍递增稀释，每递增稀释1次，随即换用1支1mL灭菌刻度吸管。8.3倾注平Ⅲ8.3.1根据试样污染程度大小，选择合适的三个连续稀释度试样进行倾注平皿。在分别作10倍递增稀释的同时，随即用该稀释度的吸管移取1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度的试样液用2个平皿。8.3.2将保温在46℃水浴锅内的营养琼脂培养基倾注于平血内，并立即转动或倾斜平，使稀释液与培养基充分混合。同时,将营养琼脂培养基倾人加有1mL空白灭菌生理盐水的另外2个灭菌平皿作空白对照。8.4平板培养待琼脂凝固后，翻转平板，使底面向上，置于(36士1)℃桓温培养箱内培养(24土2)h。291 CJ/T 3018. 14—19938.5菌落计数8.5.1培养后，应立即计数每个平板上的菌落数。如果遐上不能立即计数，应将平皿存放于 5～10℃，但不得超过24 h。8.5.2作平板菌落计数时，用肉眼观察计数，必要时用放大镜检查，以防遗漏。按30～300个菌落计数规则计算平板的菌落数。8.6菌落计数规则8.6.1首先选择平均菌落数在30~～~300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表1中例1)。8.6.2若有2个稀释度，其乎均菌落数均在30～300之间，则视两者之比来决定。若其比值小于2,应报告其平均数；若大于2，则报告其中较小的菌落总数（见表1中例2或例3）。8.6.3若所有稀释度的平均菌