QB_T 5715-2022CN发酵液中衣康酸的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67. 180. 20QBCCS X 69中华人民共和国轻工行业标准QB/T5715—2022发酵液中衣康酸的测定高效液相色谱法Determination of itaconic acid in fermentation liquorHigh performance liquidchromatography method2022-04-08发布2022-10-01实施中华人民共和国工业和信息化部发布 QB/T 言本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草，本文件由中国轻工业联合会提出。本文件由全国食品工业标准化技术委员会（SAC/TC64）归口。本文件起草单位：安徽省食品药品检验研究院、青岛琅琊台集团股份有限公司、中国生物发酵产业协会、山东省食品发酵工业研究院、山东寿光巨能金玉米开发有限公司、武汉远大弘元股份有限公司、天津科技大学。本文件主要起草人：李建军、何俊、李悦明、冯志合、田延军、李静、徐建春、吴泽华、李霞、王晋、张居舟、张文文、程坚、张成林。本文件为首次发布。I QB/酵液中衣康酸的测定高效液相色谱法1范围本文件描述了发酵液中衣康酸的高效液相色谱测定方法。本文件适用于衣康酸发醇液中衣康酸的测定2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。第一法专高效液相色谱紫外检测器法4方法提要试样中的衣康酸经甲醇溶液提取或直接稀释，经强阴离子固相萃取柱净化，利用反相液相色谱柱分高，用紫外检测器检测，外标法定量。5试剂和材料水为符合GB/T6682规定的一级水，5.1试剂5.1. 1甲醇：色谱纯。5.1.2磷酸：优级纯。5.2试剂配制5.2.1甲醇溶液（1+1，体积比）：量取250mL甲醇（5.1.1）至500mL容量瓶，用水定容，混匀。5.2.22%磷酸甲醇溶液；量取2mL磷酸（5.1.2）至100mL容量瓶，用甲醇（5.1.1）定容，混匀，%磷酸溶液：准确吸取1mL磷酸（5.1.2），转移入1000mL容量瓶，用水定容，混匀。1 QB/T 571520225. 2. 40.1%磷酸甲醇溶液（87+13，体积比）：量取0.1%磷酸溶液（5.2.3）870mL至1000mL容量瓶，用甲醇（5.1.1）定容，混匀。5.3标准品衣康酸标准品（CAS：97-65-4，CsHO4）：纯度不小于99%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。5.4标准溶液配制提示：在衣康酸配制时注意安全防护。5. 4.1衣康酸标准储备液（2.0mg/mL）：精密称取20mg（精确至0.1mg）的衣康酸标准品（5.3），用甲醇（5.1.1）溶解并定容至10mL，此溶液衣康酸含量为2.0mg/mL，于4C下保存，有效期6个月，5. 4. 2衣康酸标准工作液：分别量取适量衣康酸标准储备液（5.4.1），用0.1%磷酸甲醇溶液（5.2.4）配制成5mg/L、10mg/L、20mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L的标准工作液，于4C保存，现配现用。5.5材料5. 5.1强阴离子固相萃取小柱（SAX）：1000mg/6mL，或相当者，使用前依次用4mL甲醇（5.1.1)、4mL水、4mL甲醇溶液（5.2.1）活化。5. 5.20.45μm滤膜，有机系。6仪器和设备6. 1高效液相色谱仪：配紫外检测器。6. 2电子天平：感量0.1mg和0.01g6. 3涡旋振荡器。6. 4氮吹仪，6. 5固相萃取装置。6. 6高心机：转速不低于6000r/min。6. 7其他实验室常用仪器，7分析步踝7. 1试液制备量取500mL发醇液授匀，取适量体积经6000r/min高心5min，称取上清液1.0g（精确至0.01g）于100mL容量瓶（可根据实际样品中衣康酸的含量，增加或减少称样量），用甲醇溶液（5.2.1）溶解并定容。7.2净化移取1.00mL上述溶解液(7.1)转移至预先活化的SAX固相萃取柱(5.5.1)，控制流速约0.5mL/min，弃去流出液，用1mL甲酶水溶液（5.2.1）淋洗，再用2%磷酸甲醇溶液（5.2.2）4mL洗脱，收集洗脱液于氨吹管中，50℃下氮气缓缓吹至近干，用0.1%磷酸甲醇溶波（5.2.4）定容至1.0mL，涡旋30s落 QB/残留物，0.45um滤膜（5.5.2）过滤，供高效液相色谱仪分析。如果样品基质对衣康酸的准确定性和定量没有干抗扰，可省略7.2，将定容液经0.