新一代测序技术的原理.pptxVIP

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2023-08-01 发布于广东
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新一代测序技术的原理.pptx

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;Agenda;1 测序技术简史; 1977年，英国人Fred Sanger 发现，如果在DNA复制过程中掺入ddNTP，就会产生一系列末端终止的DNA链，并能通过电泳按长度分辨。不同末端终止DNA链的长度是由掺入到新合成链上随机位置的ddNTP决定的。由此诞生了以Sanger命名的测序原理即双脱氧链终止法测序原理。;;;;当前第8页\共有59页\编于星期四\1点;当前第9页\共有59页\编于星期四\1点;3730xl Sequence Map;2005;454测序原理;454测序流程;待测DNA文库的构建将基因组DNA/cDNA片段打断至400-800bp，将用于后继的扩增测序的接头A和一段含有生物素的接头B连接到DNA片段上，会产生含有接头AA、AB、BB、BA四种DNA片段，然后与可结合生物素的磁珠结合，其中片段AA被洗脱掉，片段AB\BA\BB结合到磁珠上，通过变性处理回收含有接头A和接头B的单链DNA。 ;Emulsion?PCR 将这些ssDNA分别单独与水油包被的直径大约28 μm的磁珠在一起孵育、退火，由于磁珠表面含有与接头互补的寡聚核苷酸序列，因此ssDNA会特异地连接到磁珠上。同时孵育体系中含有PCR反应试剂，因此可以保证每一个与磁珠结合的小片段都会在各自的孵育体系内独立扩增, 扩增产物仍可以结合到磁珠上。反应完成后，破坏孵育体系并富集带有DNA的磁珠。经过扩增反应，每一个小片段都将被扩增大约100万倍，从而达到下一步测序反应所需的模板量。;测序将携带DNA的磁珠与其他反应物混合物，放入PTP板中进行测序。 PTP板上含有很多直径约为44 μm的小孔，每个小孔仅能容纳一个磁珠，通过这种方法固定每个磁珠的位置以监测接下的测序反应。 ;454的特点;2005;;n=degenerate bases z=universal bases;当前第21页\共有59页\编于星期四\1点;当前第22页\共有59页\编于星期四\1点;当前第23页\共有59页\编于星期四\1点;当前第24页\共有59页\编于星期四\1点;当前第25页\共有59页\编于星期四\1点;当前第26页\共有59页\编于星期四\1点;当前第27页\共有59页\编于星期四\1点;当前第28页\共有59页\编于星期四\1点;;SOLiD的特点;2005;;可逆阻断技术;;;;;;;;;;;;;;;;;3.3 测序;;;;;The advantage and disadvantage of three platform;第三代测序技术;;;