LY_T 2350-2014松褐天牛携带松材线虫的PCR检测技术规范.pdf

ICS_65.020B 65LY中华人民共和国林业行业标准LY/T 2350—2014松褐天牛携带松材线虫的PCR检测技术规范Technical regulation for detecting Bursaphelenchus xylophilus fromPine sawyer (Monochamus alternatus Hope)byPCR amplification2014-08-21发布2014-12-01实施国家林业局发布 LY/T言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草，本标准由全国林业有害生物防治标准化技术委员会(SAC/TC522)归口。本标准负责起草单位：华南农业大学。本标准参加起草单位：国家林业局森林病虫害防治总站、江西省赣州市林业有害生物防治检疫局。本标准主要起草人：王新荣、孙思、朱孝伟、王永、孔祥超、宋玉双、黄敏怡、任路路、马伟杰、陈晨、赖福胜。 LY/T 2350—2014参考文[1]GB/T 23476—2009松材线虫病检疫技术规程[2]LY/T 1866—2009松褐天牛防治技术规程 I.Y/T 2350—2014中华人民共和国林业行业标准检揭天牛携带松材线虫的PCR检测技术规范LY/T 2350—2014.中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100029)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室：(010行中心，(010者服务部(010国标准出版社泰皇岛印剧厂印别各地新华书店经销开本880×12301/16邱张1字数17千字2014年12月第一版2014年12月第一次印别书号：155066·227773定价18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究LY/T报电话：(010印日期：2015年1月9日F009A LY/T 2350—2014松褐天牛携带松材线虫的PCR检测技术规范1苑围本标准规定了松据天牛（MonochamasalternatusHope）成虫携带松材线虫[Bursaphelenchuszylophilss（Steineret Buhrer）NickleJPCR检测技术的一般原则和技术要求，本标准适用于利用PCR技术定性检测携带松材载虫的松褥天牛，2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682一2008分析实验室用水规格和试验方法GB/T 21107—2007动物源性饲料中马、驴源性成分定性检测方法PCR方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1松裙天牛MonochamuselternatusHope又名松墨天牛，属昆虫纲（Insecta），鞘翅目（Coleoptera），天牛科（Cerambycidae），墨天牛属(Monochamus)，是松树的一种重要姓干害虫，又是松材线虫的主要传播媒介。松竭天牛成虫中后胸携带较多松材线虫，松揭天牛成虫形态图和脱翅松褐天牛成虫中后胸示意图参见附录A，3.2松材线虫Bursaphelenchusxylophilus松材线虫索属于线虫纳（Nematoda），滑刃目（Aphelenchida），滑刃业目（Aphelenchina），滑刃总科（Aphelenchoidoidea)，滑刃科（Parasitaphelenchidae)，伞滑刃亚科（Bursaphelenchinae），伞滑刃属（Bsrsaphelenchus），是引起松树枯要死亡的直接原因，也是本标准所要检测的目标。3.3聚合酶链式反应polymerase chain reaction; PCR聚合酶链式反应，是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便和省时等特点。参见GB/T21107—2007中3.1的规定，3.4引物primer一段短核苷酸序列。其功能是作为核苷酸案合作用的起始点，在聚合反应时，刺激合成一条与模板互补的DNA的序列。3.5内部转录间隔区internal transcribed spacer简称ITS,位于核糖体小亚基（18SrDNA）和大亚基（28SrDNA）基因保守序列区之间的核苷酸- LY/T 2350—2014序列，包括ITS1和ITS23.6阳性对照positive control试验的一个控制处理，用于检验试验本身的正确与否，即在用分子生物学技术手段对物种进行检测鉴定时，一个试验处理的模板为该物种的DNA。