DB37_T 1780-2011水产苗种中孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物残留量的测定 液相色谱法.pdf

ICS 65. 150B50DB37山東东省地方标准DB 37/T 1780—2011水产苗种中孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物残留量的测定液相色谱法2011-01-06 发布2011-03-01实施山东省质量技术监督局发布 DB37/ T 1780—2011前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省海洋与渔业厅提出。本标准由山东省海洋渔业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省海洋水产研究所、山东省水产品质量检验中心：本标准主要起草人：宫向红、刘义豪、刘慧慧、徐英江、秦华伟、任传博、邹荣婕、邓旭修。I DB37/ T 1780—2011水产苗种中孔雀石绿、结晶紫、亚甲基蓝及其代谢物残留量的测定液相色谱法1范围本标准规定了水产苗种中孔雀石绿(MG)、结晶紫(CV)、亚甲基蓝(MB)及其代谢物残留量的波相色谱测定方法。本标准适用于水产苗种中孔雀石绿、结品紫、亚甲基蓝及其代谢物隐色孔雀石绿(MG)、隐色结品紫(LCV)、天青A(AZ-A)、天青B(AZ-B)、天青C(AZ-C)残留量的测定。22规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法农业部1192号公告-1-2009水产苗种违禁药物抽检技术规范3原理样品中残留的孔雀石绿、结晶品紫、亚甲基蓝及其代谢物用乙-乙酸铵援冲液提取，二氯甲烷液液萃取，固相萃取柱净化，反相色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法定量。4试剂除另有规定外，所有试剂购为分析纯，试验用水符合GB/T6682一级水的标准。4.1乙睛：色谱纯。4.2二氟甲烷：色谱纯。4.3甲醇：色谱纯。4.4甲酸。4.5冰乙酸。4.6二甘醇。4.7氨水。4.8乙酸铵。4.9盐酸羟胺。4.10对-甲苯磺酸。4. 1120%盐酸羟胺溶液：称取盐酸羟胺20g，溶解于100mL水中。4. 121.0mo1/L对-甲苯碳酸溶液：称取对-甲苯酸19.0g，溶解于100mL水中。4. 130.125mol/L乙酸铵缓冲溶液：称取9.64g乙酸铵溶解于1000mL水中，冰乙酸调pH到4.5。4. 14定容液：乙晴+乙酸铵缓冲溶液（20+80，v/v）。 DB37/ T 1780—20114.15标准晶：孔雀石绿（malachite green，MG）、结晶紫（crystalviolet，CV）、亚甲基蓝（methyleneblue，MB）、天青A（azure A，AZ-A）、天青B（azure B，AZ-B）、天青C（azureC，AZ-C）、隐色孔雀石绿（leucomalachitegreen，LMG）、隐色结晶紫（leucocrystalviolet，LCV），纯度均大于98%。4.16标准储备落液：准确称取适量的孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结品紫、隐色结晶紫标准品，用乙睛分别配制成100g/mL的标准储备溶液：准确称取适量的亚甲基蓝、天青A、天青B、天青C标准晶，用甲醇分别配制成100g/mL的标准储备溶液。-18℃避光保存，有效期6个月。4.17混合标准中间液（1.0g/L）：分别准确吸取1.00ml亚甲基蓝、天青A、天青B、天青C、孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的标准储备溶液至100叫容量瓶中，用乙睛稀释至刻度，配制成1.0g/mL的混合标准中间液。-18C避光保存，有效期1个月。4. 18混合标准工作落液：根据需要，临用时准确吸取一定量的混合标准中间液，用定容激准确稀释至适当浓度。4.19洗脱液A：甲醇50mL，二氯甲烷50L，氨水5mL，或按其比例，混匀。4.20洗脱液B：洗脱液A100叫，加甲酸1mL，或按其比例，混匀。5仅器与设备5.1高效液相色谱仪：配紫外检测器。5.2电子天平：感量0.00001g5.3天平：感量0.01g。5.4 离心机: 4 000 r/mina5.5旋涡报荡器。5.6固相萃取装置。5.7旋转蒸发仪。5. 8周相举取小柱：DSC-MCAX，300g，3mL：或与之相当者。5.9氧化铅柱：35mm×4.6mm（内径），柱内填料：氧化铅+硅藻土（1+1）。6测定步骤6.1样品制备6.2提取称取10g（精确至0.01g）样品于50mL离心管内，加入盐酸羟胺溶液（4.11）1.5mL，对-甲苯碘酸溶液（4.12）25ml，乙酸铵缓冲溶液（4.13）5ml，乙睛10mL，旋涡混匀1min，超声提取10min4000r/min离心10min，上清液转移至100mL离心管中，残渣用乙睛10mL重复提取，合并上清液。6.3液液萃取净化在100ml离心管中加入水10mL，二甘醇2mL，二氯甲烷15ml，剧然报荡2