NY_T 3608-2020CN畜禽骨胶原蛋白含量测定方法 分光光度法.pdf

ICS 67.120.01x 22NY中华人民共和国农业行业标准NY/T禽骨胶原蛋白含量测定方法分光光度法Determination of collagen content in livestock and poultry bone-Colorimetric method2020-03-20发布2020-07-01实施中华人民共和国农业农村部发布 NY/T 3608—2020前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草，本标准由农业农村部乡村产业发展司提出。本标准由农业农村部农产品加工标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院农产品加T研究所、青岛味之源食品有限公司、内蒙古草原鑫河食品有限公司、山东东阿东盛阿胶产品科技开发有限公司、山东荣信水产食品集团股份有限公司、得利斯集团有限公司。本标准主要起草人：张春军、王航、贾伟、李侠、张德权、张湾偶、叶孟亮、刘佳助、杨东、汪文静、刘玉峰、郑乾坤，T NY/T3608—2020畜禽骨胶原蛋白含量测定方法分光光度法1范围本标准规定了分光光度法测定畜禽骨胶原蛋白含量的原理、试剂及材料、仪器和设备、分析步骤、计算和精渐度等。本标准适用于以畜食动物骨(包括鸡、猪、牛、羊)为原料，经提取生产的蛋白产品中胶原蛋白含量的测定，2术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2. 1胶原蛋白换算系数comversion coefficient of collagen不同骨源或样品中胶原蛋白含量与羟脯氮酸含量的比值。3原理羟脯氨酸是胶原蛋白的特征性氮基酸，不同禽骨胶原蛋白的羟脯氨酸含量和胶原蛋白含量旱稳定的相关性，本方法用分光光度法测定畜食骨胶原蛋白中羟脯氨酸含量，乘以对应的换算系数，得到胶原蛋白含量。4试剂及材料如无特别说明，所用试剂均为分析纯，水为蒸水或去离子水。4.1试剂4.1.1盐酸(HCI)。4. 1.2一水柠橡酸(C,H,O,·H,O)。4. 1. 3氢氧化钠(NaOH)，4. 1. 4无水乙酸钠(CHCOONa)，4. 1.5三水·N-氟-对甲苯碘酰胺钠(氯胺T)(C,H,CINNaO,S·3H,O)，4. 1. 6正丙醇(C,H,OH)。4. 1. 7对二甲氨基苯甲醛(C,HuNO)。4. 1. 8高氟酸(HCIO,），4. 1.9异丙醇(C.H.O)。4. 1. 10羟脯氨酸（C,H,NO,），纯度≥99%，4. 1. 11乙酸(CH,O,),4. 2试剂配制4.2.1盐酸溶液(6mol/L)取500mL盐酸加水释至1000mL，混匀。4.2.2缓冲溶液(pH=6.8)包括下列组分：a)26.0g一水柠檬酸；b)14.0g氢氧化钠；1 NY/T 3608—2020c）78.0g无水乙酸钠用500mL水溶解上述试剂并转人1000mL的容量瓶，加人250mL正丙醇，用水定容，用乙酸调节pH至6.8。该溶液于4℃避光，可稳定保存14d，4.2.3氯胺T溶液(0. 05mol/L)分溶解，现用现配，4.2.4显色剂称取10.0g对二甲氨基苯甲醛于烧杯中，用35mL高氯酸溶液溶解，缓慢加人65mL异丙醇，混匀，现用现配。4.2.5羟脯氨酸标准溶液标准储备液称取50mg(精确到0.1mg)羟脯氨酸于烧杯中，用水溶解后转移至100mL容量瓶中，加人一滴盐酸溶液（4.2.1)，用水定容至刻度，混匀，即得500ug/mL标准销备液，于4C避光保存，有效期30d。标准工作液作溶液，用水定容，所得标准.T.作液浓度依次为0.5μg/mL、1.0μg/mL、1.5μg/mL、2.0μg/mL、5.0μg/mL。现用现配.5仪器和设备5.1 pH计.5.2分析天平：感量为0.0001g。5.3水解管：耐压螺盖玻璃试管。5.4干燥箱：可控温于(105±1)℃。5.5水溶锅：可控温于(60±1)℃.5.6具塞试管，5.7涡旋振荡器。5.8可见光/紫外分光光度计。6分析步露6.1羟脯氨酸标准曲线的绘制6.1.1取4.0mL羟脯氨酸标准T.作液（)于具塞试管中，加人2.0mL氧胺T察液（4.2.3)，混合后于室温下放置20min。6.1.2加入2.0mL显色剂于具塞试管中，用涡旋振荡器充分混合。6.1.3将具塞试管迅速放人60C水浴中，保持20min，6.1.4取出具塞试管，用流动水冷却3min~5min，在室温下效置30min。6.1.5以水作为空白，于558nm处用分光光度计测定吸光值，平行测定3次，取均值。6.1.6以标准溶液中羟脯氨酸含量（μg/mL)为横坐标、以扣除了空白的标准工作液的吸光度为纵坐标绘制标准曲线，或求线性回归方程。再次分析应重新绘制标准曲线。6.2羟脯氨酸含量测定6.2.1样品制备对块状样品需磨碎或者剪碎备用.粉末状、膏状、液体样品直接用于测定。称取