DB37_T 3374-2018玉米粗缩病病原检测技术规程.pdf

ICS65. 020B 01DB37山東东省地方标准DB 37/T3374—2018玉米粗缩病病原检测技术规程Technical regulation for pathogen detection of maize rough dwarf disease2018-07-19发布2018-08-19实施山东省质量技术监督局发布 DB37/T 言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由山东省农业厅提出。本标准由山东省农业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：山东省农业科学院植物保护研究所。本标准主要起草人：要珊珊、幸相启、王升吉、吴就、张眉、辛志梅。I DB37/T 3374—2018A.2.3封闭液取脱脂奶粉5g加入到100mLPBST，充分溶解，4C保存A.2.4底物稀释缓冲液(pH9.5)Tris·C112.11g，氯化镁（MgC1.）2.38g，氯化钠（NaC1）5.85g，溶解于900nL蒸馏水中，用氢氧化钠调节pH至9.5，用蒸馏水定容至1000ml。A. 2. 5底物溶液（现配先用）NBT和BCIP.A. 2. 6抗血清病毒特异性抗体。A. 2. 7酶标抗体碱性磷酸酵标记抗体，A. 3逆转录-聚合酶链式反应A.3.150XTAETris·C1242g，冰乙酸52.1nL，Na;EDTA·2H;037.2g，溶解于900mL蒸馏水中，蒸馏水定容至1000mL。使用时加水稀释至1×TAE。A. 3. 2上样缓冲液0.05%溴酚蓝，0.9%SDS，50%甘油水溶液 9 DB37/T米粗缩病病原检测技术规程1范围本标准规定了玉米粗缩病主要病原水稻黑条矮缩病毒的间接ELISA、Dot-ELISA和普通RT-PCR检测方法。本标准适用于山东省玉米租缩病病原水稻黑条矮缩病毒在传搭介体灰飞虱和玉米中的检测。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14926.50实验动物酵联免疫吸附试验SN/T 1193基因检验实验室技术要求SN/T 2964植物病毒检测规范SN/T 1666水箱条纹病毒、水稻矮缩病毒、水稻黑条矮缩病毒的检测方法普通RT-PCR方法和实时荧光RT-PCR方法3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1玉米粗缩病Maize rough dwarf disease, MRDD一种爆发流行性病毒病害，在山东其主要病原为水稻黑条矮缩病毒。玉米感染粗缩病后，节间粗短、生长退缓、病株矮化：叶背、叶鞘上出现租细不等的蜡白色条状突起：心叶不易抽出且变小，叶片宽短僵直，叶色浓绿，顶部叶片族生：雕穗、雌穗发育不良，畸形不实或籽粒减少，严重影响玉米的产量。3. 2水稻黑条矮缩病毒Rice blackstreaked dwarf virus, RBSDV呼肠孤病毒科（Reoviridae），斐济病毒属（Fijivirus），病毒粒子、传播途径及危害：病毒粒体球状，直径70n75nm，具有双层外壳蛋白，病毒基因组由10片段双链RNA组成，在自然界中以灰飞虱传毒为主，导致寄主植物矮化、潜叶脉瘤肿等症状，主要侵染未本科植物。3. 3灰飞虱 Sma11 Brown Planthopper, SBPH DB37/T丁名为Laodelparstriate/lus，属同翅目，飞虱科，寄主植物主要有水霜、小麦、玉米、高案、禾本科杂草等禾本科植物，是水稻黑条矮缩病毒的主要传播介体，以持久性不经卵方式传播病毒，1代成虫发生量与带毒率是影响玉米粗缩病发生流行的关键因素。3. 4酶联免疫吸附测定enzymeIinked immunosorbentassay，ELISA具体描述参照GB/T14926.503. 5间接酶联免疫吸附测定indirect enzymelinked immunosorbent assay，1ELISA简称IELISA，首先用样品中抗原包被于固相载体，经洗涤，加入相应病毒的抗体，形成待测抗原抗体复合物，再经孵有洗涤后，加入酶标记二抗，形成固相抗原-抗体-酵标二抗复合物，测定加底物后的显色程度，确定待测抗体含量。3.63斑点酶联免疫吸附测定dot enzymelinked immunosorbentassay，Dot-ELISA以纤维素膜代替免疫酶固相载体法中常用的聚苯乙烯微量反应板而建立的一种免疫检验方法。不仅保留了常规ISA的优点，而且还弥补了抗原或抗体对载体包被不年等不足，所以具有敏感性高，特异性强，被检样品用量少，节省材料，不需特殊仪器，结果判定简单易行和便于长