LY_T 2620-2016西南桦无性系组培育苗技术规程.pdf

ICS 65.020.20LYB 61中华人民共和国林业行业标准LY/T 2620—2016西南桦无性系组培育苗技术规程Technical regulation for Betula alnoides clones prapagation via tissue culture2016-01-18发布2016-06-01实施国家林业局发布 LY/T 2620—2016前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由全国林木种子标准化技术委员会（SAC/TC115)归口。本标准负责起草单位：中国林业科学研究院热带林业实验中心。本标准主要起草人：谌红辉、蔡道雄、贾宏炎、王小宁、郭文福、刘志龙、农淑霞、蒙彩兰、马跃。 LY/T 2620--2016西南桦无性系组培育苗技术规程1 范围本标准规定了西南桦无性系组培育苗的外植体采集与处理、培养基配制、组培苗增殖与生根培养、组培苗移栽、苗木管理与出圃等技术要求。快繁。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6001育苗技术规程LY/T 1000容器育苗技术LY/T 1882林木组织培养育苗技术规程LY/T 1948西南桦用材林培育技术规程3术语和定义LY/T1882界定的术语和定义适用于本文件。4培养基配制4.1培养基成分外植体诱导培养基、增殖培养基与生根培养基见附录 A。4.2母液配制按照LY/T1882执行。4.3培养基配制后再加人第二种母液，并加人定量的凝固剂与蔗糖，加水定容后充分搅拌溶解。4.3.2将配制好的培养基溶液用不锈钢精锅加热至沸腾，使培养基完全溶解，然后用1.0mol/L盐酸或1.0 mol/L氢氧化钠调整 pH 至 5.8。4.3.3培养基加热溶解后定量分装到高度为10cm~~15cm的透光玻璃培养瓶内，进行密封。4.4培养基消毒4.4.1将分装好的培养基放人灭菌锅内消毒。消毒过程严格按灭菌锅的使用技术规程操作，灭菌气压采用0.11 MPa，温度采用121℃，消毒时间 25 min～30 min。1 LY/T 2620—20164.5培养基保存培养基尽量现配现用。需要保存时，应放置在无尘、避光的室内进行常温保存，保存时间不超过30 d.5准备工作5.1超净工作台准备接种使用超净工作台，工作前应用75%的酒精将工作台擦一遍，然后启动工作台并开启紫外灯消毒 30 min。关闭紫外灯15 min后才能进行接种工作。5.2工具灭菌用于接种的器Ⅲ先用消毒锅消毒，接种工具剪刀、镊子、医用手术刀片用置于超净台上的酒精灯、电热消毒器消毒。将消毒干净的接种工具搁置在无菌的接种器血上，待冷却至常温方可使用。5.3环境灭菌定期清洁超净工作台的初级过滤器。定期打扫、清理接种间，并定期开启紫外灯进行消毒。6外植体采集、处理6.1外植体采集采集优树无性系嫁接苗萌发的嫩芽作为外植体，或采集优树基干部位萌发的嫩芽作外植体。作为外植体的嫩芽应为生长健壮，无病虫害，半木质化。采集外植体的天气选择晴天。6.2外植体处理6.2.1外植体消毒前，用洗洁精洗净，然后用蒸馏水冲洗 5 min～8 min。6.2.2在超净工作台中，用0.1%的氯化汞加3滴～5滴吐温一20的消毒液消毒3min~~4min，然后用无菌水冲洗4次-6次，每次3 min-4 min。7外植体接种将消毒后的外植体切成长2cm左右，含有1个2个腋芽的枝段，接种在外植体的诱导培养基上。外植体接种后进行暗培养 5d～7 d,转人光培养。培养室内的温度控制在 23℃～28℃,光照强度为1 500 1x-3 000 lx，光照时间 8 h/d-12 h/d,培养时间 40 d-60 d。8增殖培养8.1接种8.1.1外植体经诱导萌发出嫩芽后，用剪刀剪取嫩芽接种到增殖培养基进行增殖培养，当培养材料萌发出丛生芽后，用剪刀或刀片分离成单个小芽植人增殖培养基进行继代培养，继代培养周期40d～60 d. LY/T 2620---20168.1.2接种器Ⅲ与培养器Ⅲ中放置的培养材料多少要适中，培养材料插入培养基深度以不倒伏为宜，分布均匀。8.1.3每瓶培养材料接种完成后应将接种工具消毒1次。接种完成后，应在培养器皿上做好相关的标记工作。8.1.4从外植体诱导分化开始，继代培养不超过40代，保持遗传相对稳定性。8.2培养条件培养室内的温度控制在23℃~28℃，光照强度为 15001x～30001x,光照时间8 h/d～12 h/d。9生根培养选择2 cm～3 cm 的茎芽接种在生根培养基中进行生根培养，生根苗只保留 1个苗芽，多余的苗芽应切除。生根培养的温度、光照强度和光照时间同 8.2生根培养时间 4