LY_T 2756-2016白蜡品种分子鉴定方法 SRAP分子标记法.pdf

ICS 65.020B 61LY中华人民共和国林业行业标准LY/T2756—2016白蜡品种分子鉴定方法一SRAP分子标记法Molecular identification method for fraxinus varieties with SRAP(sequence-related amplified polymorphism)molecular markers2016-10-19发布2017-01-01实施国家林业局发布 中华人民共和国林业行业标准白蜡晶种分子差定方法-SRAP分子标记法LY/T 2756—2016中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100029)北京市西城区三里河北街16号(100045)总编室：(010行中心：(010者服务部：(010国标准出版社泰皇岛印剧厂印别各地新华书店经销.开本880X×12301/16印张1字数26千字2019年2月第一版2019年2月第一次印别书号：155066·2-33049定价18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话：(010 LY/T 2756—2016B.80.8%琼脂糖凝胶的配制化至溶液透明（确保所有琼脂糖颗粒均完全熔化)，冷却至50℃~60C，加人EB(1mg/mL)溶液使其终浓度为0.5μg/mL，混匀后倒人放好梳子(距底板约1mm)的载板上，疑胶厚度为3mm~5mm，待凝胶完全凝固后放人电泳精中，然后向精内加人1×TBE稀释缓冲液至液面刚好没过胶板上表面。686×DNA上样电泳缓冲液(DNA Lording Buffer)6XDNALordingBuffer，其中含0.05%（质量分数）漠酚蓝、0.05%（质量分数）二甲苯青、30mmol/LEDTA，36%（质量分数)甘油和ddHO。使用时按照每5μLDNA样品加人1μLDNA上样缓冲液的比例，混匀DNA样品和DNA上样缓冲液后，直接加到点样孔即可，8 LY/T 2756—2016d录(规范性附录）非变性聚丙炜酸胺凝胶电泳试剂非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂见表C.1~表C.4。表 C,140%丙烤酰胺（acrilamide）贮备液成分用量备注丙酸胺(acrilamide)380 g用400mL去双蒸水加热溶解甲义双丙婚酸胺(bis-acrilamide)20 g用200mL去双蒸水溶解最终体机1 000 mL棕色瓶中室温保存表 C.210%过硫酸铵(ammoniumpersulphate）溶液成分用量备注过硫酸铵(ammonium persulphate)1g现用我配双燕水(ddH,O)10 mL分装后—20保存表 C.3成分用量备注Tris ak(Tris bsse)108 g硼酸(boric acid)55 g0,5 mol/L EDTA(pH 8,0)40 mL用双蒸水定容至1000mL最终体积1 000 mL室温保存表 C.48%非变性案丙烯酸胺工作液成分用量往40%丙烯酰胺忙备液10 mL现用现配5 mL双蒸水(ddH,O)35 mL10%过酸线(ammonium persulphate)100 μL国甲基乙二股（TEMED)200 μL LY/T 2756—2016附录D（规范性附录）银染试剂银染试剂见表D,1~表D,3。表 D.1固定/脱色液成分用量备往冰Z酸 (glacial acetic acid)100 mL我用现配双蔗水(ddH,O)900 mL表 D.2硝酸银（AgNO）染色液分用量备硝酸(AgNO,)3 g37甲(formaldehyde)1.6 ml双蔗水(dH,O)500 mL现用现配，避光室湿保存表 D.3氢氧化钠(NaOH显影液成分用量各氢氯化钠(NaOH)10 g用前在4C冰箱预冷30min37X甲(formaldehyde)2 mL双熹水(ddH,O)500 mL现用现配，遵光室温保存10 LY/T 2756—2016附录E（资料性附录）本整定方法选用的白蜡品种种）及电泳图本鉴定方法选用的白蜡品种(种)及电冰图见表E.1，图E.1和图E.2，表 E.125份白婚材料一览表编号品种(种)拉丁学名采集地1新盈小叶白蜡Frarinss Sogdiana Bunge山东东营中国白络Frazisus chinensis Roxb山东东营对节白蜡Fraxinss hupehensis Chs, Shang et Su.山东东营4金叶垂枝白蜡Frazinss Pendala山东东营15欧州金枝白蜡Frazinus ezcelsior ‘Jaspidea山东东营金叶白蜡Frazinus chinessis Jingye山东东营红叶白蜡Frarinss Amer