HG_T 5942-2021CN稳定同位素15N标记的氨基酸.pdf

ICS 71. 040. 99CCS G 60HG中华人民共和国化工行业标准HG/T5942—2021稳定同位素15N标记的氨基酸Stable isotope 15N labeled amino acid2021-12-02发布2022-04-01实施中华人民共和国工业和信息化部发布 HG/T 5942—2021前言本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起章规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任，本文件由中国石油和化学工业联合会提出。本文件由全国肥料和土壤调理刻标准化技术委员会（SAC/TC105）归口，本文件起草单位：上海化工研究院有限公司、上海稳定性同位索工程技术研究中心。本文件主要起草人：雷雯、侯捷、侯静华、杜晓宁、肖斌、李虎林、宋明鸣、解龙、陈燕秋、徐中岚、林铁凡。(19)I HG/T 5942—20217. 4. 2液相色谱-质谱法7.4.2.1原理将样品用甲醇溶液（甲醇与水体积比1：1）溶解，引人液相色谱-质谱的电喷雾离子源（ESI)，使样品溶液发生静电喷雾，在近大气压下的干爆气流中形成带电雾滴。随着溶剂蒸发，通过离子蒸发等机制形成气态离子，进人质谱分析，按离子的质荷比（m/）不同加以分高，最终被高子收集检测器采集到相应的质谱信息，经计算、校正后输出各m/峰强度，用“质量簇”分类法（原理参见附7.4.2.2试剂或材料7.4.2.2.1甲醇：质谱级。7. 4. 2. 2. 2甲醇溶液：1十1。7. 4.2.2.3高纯氮气：纯度99.999%，7. 4. 2. 3仪器设备7. 4. 2. 3. 1通常实验室用玻璃仪器及设备。7. 4.2. 3.2液相色谱-质诺谱联用仪，7. 4. 2. 3. 3蜻动泵，7. 4. 2. 3. 4离心管：1.5mL.7, 4. 2. 4质谱条件推荐的质谱条件如下：电喷雾电压：4kV；调谐滤镜电压：70V；脱溶剂管温度：250℃；雾化气流量：4L/min加热模块温度；350℃；-干煤气流量：10L/min；单次质谱扫描时间：0.18；质谱谱图叠加次数：20扫捕模式：正离子模式；扫描范围，N标记的氨基酸样品分子量士10Dalton；辨动泵流速：10μL/min。典型质谱图参见附录A，7.4.2.5试验步骤7.4.2.5.1试样的溶解取少量试样，置于离心管中，加人1mL甲醇溶减，充分溶解，浓度约为10mg/L。微两份试样的平行测定。(28) HG/T5942—20217. 4. 2. 5. 2试样的测定将7.4.2.5.1的试渡吸人进样针，连接到质谱仪进样系统，待仪器真空度低于2×10-Pa后，利用端动泵将进样针内的落液推人质谱仪离子源，采集正离子模式扫描的N标记的氨基酸样品分子量土10Dalton的信号峰，输出相应的信号峰强度数据A、AM+1、AM+、AM+3，按公式（3）计算得到试样的N同位索丰度。7.4.2.6试验数据处理7.4.2.6.115N标记的L-精氢酸同位素丰度7.4.2.6.1.115N标记的L-精氨酸同位索丰度的摩尔分数计算采集质谱图中质荷比m/=为175、176、177、178、179的峰强度数据，计为A175～A179，代人公式（3）计算，得到工。～工.计算示例参见附录D，[A175 = , X 0. 918A1=X0.075+,X0.918A1=X0.007+X0.075+X0.918[A 17 ... (3),X0.007+X0.075+X0.918A179 =,X0.007+,X0.075+x,X0.918(+,+,=1式中：。—标记0个N原子的N氨基酿分子的摩尔分数；标记4个1N原子的N氨基酸分子的摩尔分数，7.4.2.6.1.215N同位索率度的计算与表述15N同位索丰度值以E计，数值以atom%N表示，按公式（4）计算4X100. (4)计算结果保留小数点后1位。取平行测定结果的算术平均值作为测定结果。7.4.2.6.215N标记的L-丙氨酸、甘氨酸、L-亮氢酸、L-异亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-天冬氨酸同位素丰度7.4.2.6.2.115N标记的L-丙氨酸、甘氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸、L-苯丙氨酸、L-天冬氨酸同位素丰度的库尔分数计算采集N标记的氨基酸试样的质谱图中质荷比m/为M（天然丰度氨基酸的分子量）和M十1的峰强度数据，计为A、A+1，代人公式（5）计算，得到。和工1。(29) HG/T 5942—2021[AMix=Iga(5)[。 1式中：——标记1个N原子的N氨基酸分子的摩尔分数。每种氮基酸的a、6的具体值见附录C。7. 4.2. 6.2. 21N同位索丰度的计算与表述15N同位素丰度值以E计，数值以atom%N表示，按公式（6）计算：E=1