SNT 1761-2006出入境口岸西尼罗病毒病实验室检验规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1761--2006出入境口岸西尼罗病毒病实验室检验规程Codes for laboratory examination of west nile virus syndromeat entry-exit port2006-04-25 发布2006-11-15实施EB中华人民共和国岛域19154 发布“数码防伪“国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1761—2006前言本标准的附录 A 为规范性附录,附录 B、附录 C、附录 D、附录 E、附录 F均为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准由中华人民共和国江苏出人境检验检疫局负责起草。本标准主要起草人：丁永健、唐泰山、张常印、吴建峰、陈亨赐。本标准为首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 1761—2006出入境口岸西尼罗病毒病实验室检验规程1 范围本标准规定了出人境口岸西尼罗病毒病的实验室检验方法与结果报告。本标适用于出人境口岸西尼罗病毒病的实验室检验。2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1西尼罗病毒west nile virus西尼罗病毒属黄病毒科黄病毒属，,为单链 RNA病毒。西尼罗病毒在抗原性上与乙型脑炎病毒、圣路易脑炎病毒、Murray 山谷脑炎病毒和Kunjin 病毒(西尼罗病毒的澳洲亚型)类似,所以在血清学检查时,这些病毒之间常有交叉反应。西尼罗病毒分两个基因型,导致疾病的西尼罗病毒对人类感染的分离株主要为1型。2. 2西尼罗病毒病west nile virus syndrome西尼罗病毒病是种主要经蚊媒传播的人畜共患病，主要感染鸟类、人类和马、牛等哺乳动物。3 准备3.1标本采集来自西尼罗病毒病疫区的人员、申请检验人员和可疑病员采取血液、血清或脑脊液。怀疑死于西尼罗病毒病人员可考虑采取血液、血清、脑脊液或人体组织，其中组织样品可优先采取脑组织和神经组织,其次可采取肾、脾和肝等组织。3.2实验室生物安全要求实验室生物安全要求按照附录A执行。3.3实验室仪器设备实验室设备配置根据不同检验方法来选择，参见附录 B、附录 C、附录 D、附录 E。4实验室检验4.1IgM 或 IgG 捕捉 ELISA抗体 IgM或 IgG的检测方法参见附录B。4.2 RT-PCR西尼罗病毒病毒核酸的检测方法参见附录C。4. 3 蚀斑减少中和试验(Plaque Reduction Neutralization,PRNT)抗体检测方法或分离到病毒的鉴定方法参见附录D。4. 4 西尼罗病毒分离西尼罗病毒的分离方法参见附录E。4.5推荐采用检测方法根据不同的标本材料，推荐采用以下检测方法，具体内容见表1。 SN/T 1761-—2006推荐采用的检测方法表1注呦备用检测方法最佳检测方法样品材料急性期用 RT-PCR 检测,脑脊液RT-PCRELISA出率检为 57%,血清的检出率小人血清、脑脊液病毒分离PRNT于 10%死亡病例 RT-PCR 的检出率RT-PCR病毒分离人组织为100%5 结果判定5.1组织、血、脑脊液或其他体液中分离到西尼罗病毒，判定为西尼罗病毒分离结果阳性。5.2 组织、血、脑脊液或其他体液中用 RT-PCR 检测到西尼罗病毒基因,判定为西尼罗病毒 RT-PCR检测结果阳性，或判定为西尼罗病毒基因检测结果陌性。5.3IgM 捕捉 ELISA 从脑脊液中检测到西尼罗病毒 IgM 抗体,判定为西尼罗病毒 IgM 捕捉 ELISA结果阳性。5.4IgM 或 IgG捕捉 ELISA 从血液中检测到西尼罗病毒 IgM 或 IgG抗体，或者 IgM 或 IgG捕捉ELISA结果判定为可疑,并用蚀斑减少中和试验检测到西尼罗中和抗体,判定为西尼罗病毒抗体检测结果阳性。 SN/T 1761--2006附录A(规范性附录）实验室生物安全要求根据国际上通行要求及国家实验室生物安全管理规定，西尼罗病毒归类为生物安全3级(BSL-3)病毒，所有有关西尼罗病毒的实验室操作应按照以下规定执行。A.1ELISA:前期所有操作在生物安全柜(BSC)内进行，血清被清洗后可转移至生物安全2级(BSL-2)实验室操作。A.2PRNT：所有操作在 BSL-3实验室中进行，操作人员防护、所有使用物品和废弃物按 BSL~3要求进行。A.3病毒分离：所有操作在 BSL-3实验室中进行,操作人员防护、所有使用物品和废弃物按 BSL-3要求进行。A.4PCR:前期所有操作在 BSC 内进行,病毒裂解液加人后可转移至生物安全 2 级(BSL-2)实验室进行操作。A.5人或动物户体解剖：所有操作在BSL-3实验室中进行，操作人员防护、所有使用物品和废弃物按BSL-3要求进行。A.6其他有关西尼罗病毒的操作:前期所有操作在-BSC 内进行