DB37_T 4003-2020中和试验和ELISA试验比对实验室评价标准.pdf

ICS 11. 220B 41DB37山 長东省地方标准DB37/T4003—2020中和试验和ELISA试验比对实验室评价标准2020-06-08发施山东省市场监督管理局发布 DB37/T 4003—2020前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由青岛毒关提出、归口并组织实施。本标准起草单位：青岛海关技术中心。本标准主要起草人：郑小龙、王群、姜帆、徐彪、朱来华。I DB37/T 4003—2020中和试验和ELISA试验比对实验室评价标准1范围本标准规定了中和试验和ELISA试验比对实验室评价工作应遵循的基本技术要求。本标准适用于动物检疫、兽医实验室以LISA试验替代中和试验进行抗体润度的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件，凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件，（0IE陆生动物诊断试验与疫苗手册》3试剂3. 1培养液：根据不同细胞选择适合的培养液3.2胎牛血清3.3标准毒株、阳性血清、阴性血清。3.4敏感细胞系：根据不同病毒选择适合的细胞。3.5青莓素。3.6链莓素。3. 7ELISA试剂盒4器材和设备4.196孔细胞培养板。4. 2二氧化碳培养箱。4.3普通冰箱和超低温冰箱。4.47可调移液器。4.5细胞培养瓶。4.6酵标仪。4. 7洗板机。5评价总则5.1应在最佳条件下进行比对试验，即在同一实验室，由同一批检测人员严格按照标准方法和试剂盒操作要求进行评价。5.2对已知阳性血清同时用中和试验和ELISA试验进行检测，对检测结果进行比对，确定不同抗体滴度对应的ELISA数值范围，1 DB37/T 4003—20206实验室评价6.1取已知阳性血清样品进行中和试验，测定其抗体滴度。具体操作按照《0IE陆生动物诊断试验与疫苗手册》进行，6.2对已知阳性血清进行稀释，以获得抗体滴度分别为1:2，1:4，1:8，1:16，1:32，1:64的血清样品。6.3将每个滴度的已知阳性血清样品按照ELISA试剂盒说明书进行检测，测定其OD值，并根据说明书计算最终数值。6.4将已知阳性血清的抗体滴度与ELISA结果进行比对，确定各滴度的已知阳性血清对应的ELISA数值的范围，并标定阳性对照血清的抗体滴度。6.5根据ELISA阳性对照血清的数值及每个润度间ELISA数值的波动范围，调整每次试验抗体滴度所对应的ELISA数值范围，以确定未知样品抗体滴度2