YY_T 0870.6-2019医疗器械遗传毒性试验 第6部分：体外哺乳动物细胞微核试验.pdf

ICS_11.040.01C 30YY中华人民共和国医药行业标准YY/T 0870.6—2019医疗器械遗传毒性试验第6部分：体外哺乳动物细胞微核试验Test for genotoxicity of medical devices-Part 6:In vitro mammalian cellmicronucleus test2019-07-24发布2020-08-01实施国家药品监督管理局发布 YY/T0870.6—2019前言YY/T0870(医疗器裁遗传毒性试验》由以下部分组成：第1部分：细菌回复突变试验；第2部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验；第3部分：用小鼠淋巴瘤细胞进行的TK基因突变试验；第4部分：哺乳动物骨髓红细胞微核试验；第5部分：哺乳动物骨髓染色体跨变试验；第6部分：体外确乳动物细胞微核试验，本部分为YY/T0870的第6部分。本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草，请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家药品监督管理局提出。本部分由全国医疗器械生物学评价标准化技术委员会(SAC/TC248)归口。本部分起草单位：山东省医疗器械产品质量检验中心、深圳市药品检验研究院（深圳市医疗器械检测中心)，本部分主要起草人：王蜜窝、王昕、曹草、王晓炜、林钟石。- YY/T 0870.6—201913试验报告试验报告中宜包含下列信息：a)试验样品：来源，批号，有效日期，如果可能受试物的稳定性，如果知道；受试物在介质申的落解性和稳定性，如果知道；测定受试物在培养基中的pH，渗透压和沉淀反应，适当的。b)介质：介质选挥的合理性；在最终细胞培养基中介质所占的百分比。c)细胞:所用细胞类型和来源；无支原体污染的资料；细胞培养的代数(适用时)；细胞系的细胞培养方法；细胞系的模式染色体数量。(p试验条件：胞质分裂阻断剂(cytoB)的确认，如浓度和接触时闻；在培养基中受试物的最终浓度(μg/mL，mg/mL，mmol/L)；细胞培养液的组分，CO，体积分数（适用时)和湿度水平；落剂和所加受试物的浓度（和/或体积）；培养温度和时间；接触时间；接触后收获时间；接种时细胞浓度（适用时)；养液的浓度或体积，S9的质量控制)；阳性和朗性对照物的最终浓度；制片和染色所用技术和方法；计数微核细胞的标准（分析细胞的选择和微核的鉴定)；分析细胞的数目；细胞毒性的测试方法；细胞毒性和方法的其他相关信息（适用时）；阳性、阴性或可疑结果的接受标准；测定pH、渗透压和沉淀的方法（如果有）。结果：符合用于分析的细题的定义；细胞毒性的测量，CBPI或RI计数；其他的指标（细胞覆盖程度，细胞调亡，细胞坏死，中期相细胞数，双核细胞频率）； YY/T 0870.6—2019一用于暴露处理的培养基的pH和渗透压（如果有）；每个暴露处理组和对照组的培养物应分别计数带有微核的细胞数，并说明其是双核细胞还是单核细胞(如果适用)，剂量反应关系，如果可能；阴性（溶剂/载体）和阳性对照资料（浓度/剂量和溶剂）：历史性阴性对照(溶剂/载体)和阳性对照资料；统计学分析，P值（如果有）。结果的讨论。g）结论。 YY/T 0870.6—2019附录A（资料性附录）S9和S9混合液制备A.1大鼠肝S9液A.1.1选健康雄性成年SD或Wistar大白鼠，约5周龄～6周龄，推荐采用苯巴比妥和β-萘费酮联合诱导，d1、d2、d3.d4大鼠腹整注射苯巴比要，每天1次，d1剂量为30mg/kg体重；剩下3d每次剂量为相当于60mg/kg体重。d3和d4，在注射苯巴比妥的同时，腹腔注射β-恭黄酮，每天1次，每次剂量为80mg/kg体重。注：也可采用多氯联苯（Aroclor1254)，将Aroclor1254落于玉米抽中，激度为200mg/mL，按500mg/kg（体重）无菌操作一次腹腔注射，A,1.2第5d用颈动脉放血法处死动物，打开腹腔，用20mL新鲜冷至4C的0.15mol/L氯化钾溶液进行肝门静脉瑞注后，小心分离并将肝脏完整取出，取出肝脏称重后，用0.15mol/L氧化钾落波连续冲洗数次，以便除去能掉制微粒体酶活性的血红蛋白。每克肝（湿重）加0.1mol/L氯化钾液3mL，连同尧杯移人冰溶中，用灭菌剪刀剪碎肝脏，在玻填匀浆器（低于4000r/min，往复1min～2min)，或组织勾浆器(20000r/min，1min)中制成肝匀浆，以上操作需注意无菌和局部冷环境（4C)。A,1.3将制成的肝匀案在低温(0℃～4C)高速离心机上，以9000g离心10min，吸出上清液为肝6SA,1.44S9制成后，经无菌检查，测定蛋白含量，每毫升蛋白含量宜不超过40mg，并经间接致瘤物（诱变剂)鉴定其生物活性合格后，分装于无菌冷冻管或安鼠中，每安鼠2