YY_T 1574-2017组织工程医疗器械产品 海藻酸盐凝胶固定或微囊化指南.pdf

ICS_11.040.40YY中华人民共和国医药行业标准YY/T1574—2017组织工程医疗器械产品海藻酸盐凝胶固定或微囊化指南Tissue enginccring mcdical device products-Standard guide for immobilization or encapsulation in alginate gels2017-08-18发布2018-09-01实施国家食品药品监督管理总局发布 YY/T 1574—2017目次前言1范围2规范性引用文件术语和定义意义和用途5海藻酸盐凝胶固定或微囊化26微胶囊或微胶殊的性能海源酸盐疑胶的生物相容性附录A（规范性附录）用于活体细胞或组织固定化或微囊化的海薄酸盐微胶珠的制备8附录B(规范性附录)微胶囊形态、粒径大小及分布的测定6附录C(规范性附录)微胶囊孔嵌率的测定10附录D(规范性附录)微胶囊的扩散性测定11附录E(规范性附录)微胶囊的干燥测定12附录F(规范性附录)微胶囊的机械强度测定13参考文献 YY/T 1574—2017附录A（规范性附录）用于活体胞或组织固定化或微化的海源酸盐微胶殊的制备A.1材料与设备材料与设备包括：材料：海案眼盐（跟度范围为，0.5%～4.0%，过海案眼盐的干物质含量校正），用于题胶化的交联剂包括但不限于CaCls、SrCls、DaCl,（Ca*，Sr**，DBa*+浓度范围50mmol/L~150mmol/殊的包覆材料包括但不限于：象氨基酸、壳案糖、纤维素等；设备：过据器，静电微股囊发生仪，微量注射，倒置显微镜，CO：培养箱等。A.2实验方法固定化或包封活体细胞或组织的海藻酸盐微胶囊的制备方法为：a)对效生长期的细胞在微囊化前12h换没：细胞用胰酶消化后，计数调整为适当浓度：b)将细胞悬液与无菌海藻酸盐溶液混合，吹打混勺，c)酸盐微胶殊；d)海染酸盐微胶殊最荐于包爱性溶疫中，如聚整氨酸、亲精氨敢、壳聚精等，使微股珠表面的潮藻酸盐与包覆材料络合，稳定凝胶结构；e)将络合有包覆材料的海落酸盐微腔珠再悬浮于低浓度的海薄酸盐溶波中；用Cl+螯合剂(柠檬酸盐或EDTA)浸泡微胶殊，使微胶殊内的海藻酸盐凝胶液化，以利于微胶囊内细胞的生长，制备好的微囊化组胞置于37℃，饱和湿度，5%CO，培养稳中培养。A.3实验结果表征用于活体细随或组织固定化或包封的海策酸盐微胶囊形态可用例置显微镜观察。微股囊内细胆可用MTT法检测。8 YY/T 1574—2017附录B(规范性附录)微胶囊形态、粒径大小及分布的测定B.1材料与设备材料与设备包括，材料：海藻酸盐微胶囊，设备：光学显微镜，电子显微镜，激光粒度分析仪，B.2实验方法用光学显微镜观察海藻酸盐微胶囊，采用电子显微镜分析微胶囊的表面形态。利用激光粒度分析仪测定微胶塞的粒径分布，或根据2015年版《中华人民共和国药典》中关于粒径及其分布的测量方法测量，B.3实验结果表征由平均粒径、粒径分布直方图或粒径分布曲线可知微胶囊粒径大小及分布， YY/T 1574—2017录c(规范性附录）微胶囊孔障军的测定C.1材料与设备材料与设备包括：材料：海藻酸盐微胶爱；设备：扫描电子显微镜，透射电子显微镜，液相色谱仪。C.2卖验方法深用扫描电子显微锂可在高倍镜下观察测量微胶囊表面的孔大小分布：采用透则电镜可分析测酸盐凝胶形态结构；采用排阻色谱法也可测量出微胶囊孔原率。排阻色谱法是根据不同组分的分子体积大小的差异进行分离的方法。C.3实验结果表征根据扫捕电镜、透射电于显微镜和排阻色谱法可测定微胶囊表面形念结构、孔障大小及分布。10 YY/T 1574—2017附录D(规范性附录）微胶囊的扩散性测定D.1材料与设备材料与设备包括：材料，常用的微胶囊扩散性研究材料包括但不限于，异硫氰酸酯（FITC)荧光素标记的不同分子量葡聚糖；不同分子量蛋白质：一球蛋白、牛血清白蛋白、胰蛋白酶等：海藻酸盐微胶塞；设备：紫外可见分光光度计，激光共聚焦显微镜。D.2实验方法分别称取定量不同分子量的FITC-葡象糖或蛋白质，配制成不同浓度的标准溶液，测定出蛋白浓度与OD值对应值。将FITC-面聚糖或蛋白质落覆加人激胶囊中，在不同时闻点测定上清OD值；采用激光共策焦显微镜在不同时间观察微囊内外荧光强度，D.3实验结果表征做出FITC-前案糖或蛋白重浓度与OD值对应的梯准曲线：根据标准曲线作蛋白质浓度随时间变化曲线，对比微崇内外荧光强度分析微胶囊蛋白扩散性。11 YY/T 1574—2017附录E（规范性附录）微胶囊的干燥测定E.1材料与设备需用到的材料与设备：-材料：海藻酸盐改股囊，乙醇；一设备：冷冻干燥机，显微镜。E.2实验方法乙醇梯度脱水-真空冷冻干燥：将海藻酸盐微胶囊分别在浓度20%～100%（体积分数)的乙醇中洗脱，洗脱后