YY_T 1455-2016应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值及其不确定度评定指南.pdf

ICS _11,100C 44YY中华人民共和国医药行业标准YY/T1455—2016应用参考测量程序对酶催化活性浓度赋值及其不确定度评定指南Guidelines for values assignment of catalytic activity concentrations of enzymesusing reference measurement procedures and evaluation of uncerlainty2016-01-26发布2017-01-01实施国家食品药品监督管理总局发布 YY/T 1455—2016目次前言范围规范性引用文件3符号和缩略讲赋值4.1参考测量程序的选择4.2建立测源性4.3参考测量程序的评定4.4实验室内部质量控制4.5样本测量测量不确定度评定5.1不确定度的来源分析5,2测量模型的建立5.3标准不确定度的评定5.4合成标准不确定度的计算105.5扩展不确定度的确定.6测量结果及其不确定度评定结果的报告附录A（资料性附录）酶学参考测量程序信息表12附录B（资料性附录）限值在其他文献或活动中给出的信息附录C（资料性附录)LDH赋值过程及不确定度评定方法举例14（参考文献 YY/T 145520165.1.2.6所沙及常数引起的不确定度最终显色物质的率尔消光系数(=）的不确定度影响测量结果。5.1.2.7统计学处理测量数据统计处理中的数值修约、异常值(离群值)取舍影响测量结累。5,.1.2.8实验室测量精密度酶学测量其测量条件比较严格，反应过程中的温度控制、落液pH值的下降或上升、样本中分析物特性值的不稳定性直接影响测量结果，固此，测量精密度是影响测量结果可靠程度的主要因素，5.1,3可忽降的不确定度来源下列不确定度来源在此文件中予以忽略：a)在酶学测量中，考虑到底物浓度过量，同时称量使用万分之一天平进行，定容使用至少10mL的容量瓶进行，质量和体积引起的不确定度非常小，因此，露配制过程中引起的不确定度在此予以忽略;b)测量过程中，由于试剂提前加热到37℃且反应在密闭的环境中进行，试剂蒸发引起的不确定度在此予以忽略；(3每次实验前配制试剂，因此试剂不稳定引起的不确定度在此予以忽略，时间的不确定度对于测量结果的不确定度真献及其微小，在此予以忽略；e)光径的不确定度引起吸光度的测量不确定度，光径的相对标准不确定度为0.05%，酶学测量中精密度引起的测量不确定度约为1%，因此，光径的不确定度在此予以忽略；fD本文件是赋值的不确定度评定指南，其评定过程中不包括样本复落因素引起的不确定度来源。5.1.4不确定度主要来源不确定度主要来源有：a)摩尔消光系数（e）；b)吸光度变化率（会）e)反应液体积（V...）；d)启动液体积（Van）；e)样本体积（V）;f波长();g)温度(T);h)pH 值;i)测量精密度。5.2测盘模型的建立酶催化活性浓度(U/L.)测量结果的计算见式(7)：AX10″Vuph +Vructen +Veart 3AteLV umk YY/T 1455—2016式中：A吸光度变化率；E摩尔消光系数，单位为平方米每摩尔(m/mol)；L光径，单位为厘米(cm)；Vrsio反应液体积，单位为微升(μL)；Vran启动液体积，单位为微升(μL)；Vonplk样本体积，单位为微升（μL)，5.3标准不确定度的评定5.3.1率尔消光系数(e)不同显色剂在温度、pH为变量的条件下，摩尔消光系数的不确定度不同。按照相关资料的数据显示，其不确定度1%即有理由认为该值不可能是极限值，其分布形态假定为三角形分布，其相对不确定1%/6=0.4%,酶学反应是假定在规定条件下吸光度变化在一段时间内量线性变化的基础上计算测量结果，吸光)的测量不确定度即线性拟合的标准差sw除以/（3，一)，参与计算的吸光度变化率等于样本吸光度变化率减去空白吸光度变化率。按式(8)、式(9)计算吸光度变化率的标准不确定度：g =/ugt+usmu***( 8 )un + Mw M.rei44( 6 )-**5.3.3体积比（Vwrph将不确定度来源中c)、d)、e)的各不确定度分量看作是一个整体进行评定，即为体积比。按式(10)计算体根比的不确定度：Voumst + Vo+V.1 VnVunols1 +Vungk( 10 )不确定度的A类评定：对规定各加样体积至少重复测量10次，计算各测量结果的标准偏差SD，不确定度分别为不确定度的B类评定：查看加样设备计量证书相关信息确定，标准不确定度分别为v按式(11)进行不确定度的计算：(Verte + Vun)2....(.1 )5.3.4波长()参考测量程序规定的测量波长为入十1nm，其分布形态假定为正态分布，根据经验的灵敏系数，波9 YY/T 1455—201