WS 204-2001用稳定性染色体畸变估算职业受照者剂量的方法.pdf

C 60WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T 204—2001用稳定性染色体畸变估算职业受照者剂量的方法Method of dose estimated using stable chromosomeaberration for occupational irradiated subjects2001-07-20 发布2002-01-01实施中华人民共和国卫生部•发布 WS/T 204—2001前言本标准是应全国卫生标准技术委员会放射性疾病诊断标准分委会委托，借鉴国内外有关实验资料，特别是近年来发展起来的荧光原位杂交技术实践，结合我国实际情况编写的，为解决职业受照人员剂量估算的方法。本标准自2002年1月1日起实施。本标推由卫生部卫生法制与监督司提出。本标准附录 A、附录 B和附录 C是提示的附录。本标准起草单位：中国医学科学院放射医学研究所。本标推起草人：王知权。本标准由卫生部委托中国医学科学院放射医学研究所负责解释。 中华人民共和国卫生行业标准用稳定性染色体畸变估算WS/T 204—2001职业受照者剂量的方法Method of dose estimated using stable chromosomeaberration for occupational irradiated subjects1 范围本标准规定了稳定性染色体畸变分析估算职业受照者剂量的方法。本标准限于用G-显带法或用染色体核型。本标推适用于慢性职业受照人群的剂量估算，也适用于早先事故受照者的剂量估算，但不适用于近期事故性受照者生物剂量估算。2 定义本标采用下列定义2.1 职业照射 occupational exposure除了国家法规，标准所排除的照射以及按规定已予以豁免的实践或源产生的照射以外，工作人员在其工作过程中所受的照射。2.2 G-显带 G-bands by trypsin using Giemsa,GTG-显带用蛋白水解酶(胰蛋白酶)将染色体消化后，得到深浅颜色不同和宽窄度不等的特有栉型。2.3生物剂量计 biological dosimeter用以估算受照剂量的生物体系，这一生物体系受到照射后的反应与受照剂量之间存在着某种定量关系，从而可用来推定受照的剂量。2.4剂量-效应关系曲线dose-response curve当机体受照后引起的反应与受照剂量存在某种定量关系，用适当的数学模式表达，以作出相应的刻度曲线。3剂量-效应曲线的建立3.1对供血者要求3.1.1男女均可，可各选一人或只选一人；3.1.2年龄18～50岁；3.1.3无肿瘤病史；3.1.4无慢性病史；3.1.5无接触有毒有害物质史；3. 1.6未接受过大剂量的放射诊断、治疗史；3.1.7无焖酒好。1）将带有标本的载片放60C烤箱4h；用胰酶或胰酶-EITA消化：Giemsa染色，中华人民共和国卫生部2001-07-20 批准2002-01-01实施 WS/T 204--20013.2照射条件3.2.1物理剂量准确；3.2.2样品受照均匀；3.2.3温度控制在37℃±0.5℃;3.2.4剂量范围 0.1~5.0 Gy;3.2.5剂量点 7个左右,低于0.5Gy剂量点应选2～3个;3.2.6照后即置于 37℃恒温箱内,静置 90～120 min 后接种培养。3.3培养方法微最全血培养法：用 0.5 mL.全血,在无菌条件下接种人pH 为 6.8~～7.2 的含有适量植物血细胞凝集素（PHA）、抗生素、牛血清的5mLRPMI-1640培养体系，置37℃恒温箱培养52h，终止培养前2～6h或培养开始时加人适量秋水仙素。各剂量点培养瓶数，视剂量大小而定，一般是低剂量点培养数适当增加。3.4标本制备培养终止后收获细胞3.4.1低渗：小心去上清液(切勿使沉淀的细胞松动)转移到10 mL锥形刻度离心管中，加0.075 mol /L氮化钾液10mL，放37C水浴锅中低渗30min；3.4.2.预固定：加0.5ml固定液（甲醇冰乙酸=3：1)混合，1400rpm(转数/分)离心7min;3.4.3固定：去上清液，常温下固定20min，离心。反复二次；3.4.4去上清液，离心，加固定液，混匀，放置4℃冰箱16h以上；3.4.5次日再离心，去上清液，加适量新配置固定液，混匀；3.4.6制片：将适量细胞混悬液立即滴人预温37℃的载玻片上，Giemsa染色。3.5镜检要求3.5.1盲片分析；3.5.2分析者应经严格训练，能较熟练识别各种类型畸变；3.5.3阅片必须按一定的规范，先在20×镜下寻找标准细胞，然后在油镜下计数和分析；3.5.4作剂量-效应曲线的各剂量点分析细胞的计算，一般是先分析100个细胞后按式（1)计算：N = 96(1 -- P)/P·(1)式中：N—需要分析的细胞；P——畸变细胞率