NY_T 2720-2015水稻抗纹枯病鉴定技术规范.pdf

ICS 65.020B 16NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2720—2015水稻抗纹枯病鉴定技术规范Rules for evaluation of rice for resistance to sheath blight(Rhizoctonia solani Kihn)2015-08-01实施2015-05-21发布中华人民共和国农业部5发布 NY/T2720—2015前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：中国水稻研究所、中国农业大学、扬州大学、华南农业大学、福建农林大学、浙江大学。本标准主要起草人：黄世文、王玲、刘连盟、郭泽建、潘学彪、周而勋、鲁国东、王政逸、陈旭君、左示敏。 NY/T2720—2015水稻抗纹枯病鉴定技术规范1范围本标准规定了水稻品种、材料苗期和成株期对纹枯病的抗性鉴定方法和评价方法。本标准适用于水稻品种、材料抗纹枯病鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB4285农药安全使用标准GB4404.1粮食作物种子第1部分：禾谷类GB5084农田灌溉水质标准GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T8321（所有部分）农药合理使用准则GB15618土壤环境质量标准NY/T496肥料合理使用准则通则NY5117无公害食品水稻生产技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1水稻纹枯病ricesheathblight由立枯丝核菌Rhizoctonia solaniKühn所引起的为害地上部分以叶鞘、叶片为主产生云纹状病斑症状的水稻病害。3. 2融合群anastomosisgroup引起水稻纹枯病的立枯丝核菌（RhizoctoniasolaniKühn）是以菌丝融合型为基础所构成的群体，凡是两个菌株的菌丝能发生融合的则归于相同的融合群。3. 3苗挺高straighted seedling height从土表至水稻秧苗拉直后最高叶尖的高度。4试剂与材料本标准所用试剂在未加说明时均采用分析纯试剂。实验室用水应符合GB/T6682中规定的三级水要求。4.1PDA培养基称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加人1000mL水，煮沸20min～30min，纱布过滤，补水至1000mL，再加入18g琼脂和18g葡萄糖，搅拌均匀，高压灭菌（121℃，20min）。4.2PDB培养基1 NY/T2720—2015称取200g马铃薯，洗净去皮切碎，加入1000mL水，煮沸20min～30min，纱布过滤，补水至1000mL，加人18g葡萄糖，搅拌均匀，高压灭菌（121℃，20min）。4.3培养基A稻谷用清水浸泡24h后，冲洗干净，装人250mL锥形瓶中，每瓶中装人稻谷占瓶体积的1/3，高压灭菌（121℃,20min）。4.4培养基B将木质牙签剪成0.8cm～1.0cm长，纵劈为二，单层平排于直径9cm培养皿中，每皿加人适量的PDB培养基（液面高度刚好淹没短牙签），高压灭菌（121℃，20min）。5仪器设备5.1恒温培养箱：（28十2)℃。5.2显微镜：物镜头10倍～100倍5.3电子天平：感量0.01g。5.4高压灭菌器。5.5超净工作台。6苗期抗病性鉴定6.1接种体接种体为立枯丝核菌AG1-IA菌丝融合群，应符合附录A的规定。6.2试验材料6.2.1种子质量种子质量应符合GB4404.1常规稻或杂交稻一级种标准，不应带检疫性病虫。6.2.2播种选择饱满度一致的试验材料种子，经3%过氧化氢溶液浸种1d后，用清水冲洗后再浸种2d，放人垫有两层滤纸的培养皿中，置于恒温培养箱中30℃催芽。待胚根长至0.5cm时，选择芽长一致的种子播于装有灭菌土的塑料育苗箱中（长45cm×宽35cm×高10cm）。按宽窄行点播，同一品种窄行3cm，不同品种宽行5cm，种子表层覆1cm左右的灭菌土。每重复每份试验材料播10株苗。采用随机区组设计，重复3次。每50份试验材料设附录B中已知抗性的对照品种。6.2.3育苗在18℃～28℃的室外自然光照下育苗，幼苗应生长健壮、一致。苗床土保持湿润，不能有水层。6.3接种体6.3.1接种体准备根据试验需要选取附录C的鉴别菌株作为接种体，将菌株移植到PDA培养基的正中央，菌丝面朝上，盖上皿，置于人工培养箱28℃培养48h。6.3.2接种体繁殖将培养好的病原菌，在无菌条件下用直径5mm的灭菌打孔器，自菌落边缘切取菌饼，接种于培养基A，在培养箱中28℃培养7d～10d，1d～2d摇动一次，待谷粒表面布满菌丝后作为接种物备用。6.4接种6.4.1接种方法在水稻秧苗4叶期，将带有菌丝的稻谷紧贴每